实验一:草鱼p38a MAPK基因c DNA全序列克隆及表达分析p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）通路是生物体级联反应中MAPK信号通路中的一条重要信号转导通路,其p38MAPK是转导通路的重要枢纽。p38 MAPK基因在参与机体炎症、氧化应激、细胞凋亡及应对不同环境刺激中发挥着重要作用。本文利用RACE技术克隆了草鱼p38αMAPK基因,序列分析结果显示,MAPK14a基因核苷酸序列全长2374 bp,开放阅读框序列为1086 bp,编码由361个氨基酸合成的蛋白,与鲤鱼p38α氨基酸序列有98%的相似性。将此基因片段定向插入原核表达载体构建重组表达质粒p ET32-p38α后导入BL21（DE3）菌株,利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE分析发现重组融合蛋白分子量与预测值相符。荧光定量PCR检测发现MAPK 14a基因在草鱼全血、肝脏、脾脏、肾脏、心脏、脑、前肠、鳃、肌肉和皮肤中均有表达,在脑中表达最高,在皮肤和肌肉中表达最低。实验二:草鱼Nrf2基因全长的克隆、表达分析及摄食杜仲对该基因表达的影响核转录因子相关因子2（Nuclear factor erythroid-specific 2-related factor 2,Nrf2）是调控动物机体氧化还原稳态的重要转录因子,在调控物质代谢、细胞循环及细胞保护等方面有着重要的作用。本研究通过RACE获得草鱼Nrf 2基因的全长c DNA序列,并用生物信息学方法对其所编码的蛋白结构进行预测;实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测该基因在各组织中的差异表达;杜仲作为一种重要的中草药,以2%添加量添加到饲料,饲喂草鱼3个月,观察杜仲对不同组织中Nrf 2基因表达的影响。结果表明:草鱼Nrf 2基因全长2760 bp,编码593个氨基酸,所得到的Nrf 2蛋白是一种亲水性的非分泌性蛋白。Nrf2基因在草鱼肾、鳃、肝、脾、血中高表达,而在皮肤和肌肉组织中低表达。饲喂杜仲显著促进了草鱼肾脏、鳃和肝脏中Nrf 2 m RNA的表达。实验三:草鱼TFAM基因全长的克隆、生物信息及表达分析线粒体转录因子A（mitochondrial transcription factor A,TFAM）是由核基因编码,并被转入线粒体内参与线粒体DNA转录激活和调节线粒体DNA拷贝数的重要因子。利用RACE技术克隆获得草鱼TFAM基因,序列分析结果显示,TFAM c DNA全长1427 bp,开放阅读框为837 bp,可编码278个氨基酸,预测其编码蛋白的分子量为31.777 k D,理论等电点为10.41,预测所得氨基酸序列含有两个高迁移率簇蛋白（HMG）盒域和一个复杂度很低的C端结构域,与其他物种高度保守,与团头鲂的TFAM相似性达97%。荧光定量PCR检测发现TFAM基因在草鱼全血、肝脏、脾脏、肾脏、心脏、脑、前肠、鳃、肌肉和皮肤中均有表达,尤其在血液中表达量最高,在皮肤中表达最低。实验四:绿原酸及桃叶珊瑚苷对外源性H2O2干预下的草鱼L8824肝细胞抗氧化作用的影响为研究杜仲活性成分绿原酸及桃叶珊瑚苷对H2O2处理受损的草鱼L8824细胞抗氧化作用的影响。本实验建立细胞受损模型;设计空白对照组、处理组、阳性对照NAC组、绿原酸不同剂量（A1、A2、A3、A4和A5）组、桃叶珊瑚苷不同剂量（B1、B2、B3、B4和B5）组以及绿原酸与桃叶珊瑚苷混合（A3+B3）组的细胞培养试验。结果显示:与处理组相比较,NAC组、一定剂量A组与B组及（A3+B3）组细胞存活率、线粒体膜电位及SOD活性显著升高（P＜0.05）,细胞氧化损伤程度与ROS水平显著降低（P＜0.05）,基因P38MAPK m RNA表达显著降低（P＜0.05）,基因PGC-1a、Nrf2和TFAM m RNA表达均显著升高（P＜0.05）,且在A3、B3及（A3+B3）组差异最显著。试验结果表明,绿原酸和桃叶珊瑚苷影响了草鱼L8824肝细胞抗氧化能力。其可能的作用机制为绿原酸和桃叶珊瑚苷通过抑制P38MAPK磷酸化启动自由基清除机制,清除L8824细胞线粒体生物发生过程中产生的过量ROS,进而维持细胞正常的ROS水平,适量的ROS通过激活PGC-1a/Nrf2/Tfam信号通路改善线粒体功能障碍、促进线粒体生物合成;同时,已被Nrf2磷酸化的蛋白可激活下游抗氧化酶SOD和CAT等活性,从而增强草鱼L8824细胞抗氧化能力。绿原酸和桃叶珊瑚苷的建议药物浓度为40μg/ml。