【摘 要】
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研究目的:哺乳动物雄性个体的精子发生是一个受到多方面精确调控的过程。大量在精子发生过程中的调控机制至今尚不明确。探究精子发生过程中的调控机制对于男性不育的诊断治疗具有十分重要的意义。我们发现哺乳动物睾丸近基底膜处存在与精原干细胞相关的胞外囊泡,针对精子发生过程中的调控机制,我们对其展开了探讨。另外,通过对小鼠转录组测序,我们发现了一个新的在睾丸中特异性高表达的长非编码RNA并将其命名为lncRNA
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目 （81430027,81671510）；
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研究目的:哺乳动物雄性个体的精子发生是一个受到多方面精确调控的过程。大量在精子发生过程中的调控机制至今尚不明确。探究精子发生过程中的调控机制对于男性不育的诊断治疗具有十分重要的意义。我们发现哺乳动物睾丸近基底膜处存在与精原干细胞相关的胞外囊泡,针对精子发生过程中的调控机制,我们对其展开了探讨。另外,通过对小鼠转录组测序,我们发现了一个新的在睾丸中特异性高表达的长非编码RNA并将其命名为lncRNA5512,针对其在小鼠精子发生中的功能做了研究。方法与结果:1.通过两步酶消化法分离原代Sertoli细胞。通过超速离心法获得睾丸胞外囊泡,并使用免疫电镜、Nanosight、Western Blot等对其进行鉴定。2.通过Western Blot、q RT-PCR等检测原代Sertoli细胞经睾丸胞外囊泡处理后其GDNF的改变,发现Thy1+的睾丸胞外囊泡可使Sertoli细胞GDNF表达下调。3.使用CRISPR/Cas9构建lncRNA5512敲除小鼠,检测其生育相关指标的变化,发现lncRNA5512缺失对雄性小鼠精子发生及生育力无显著影响。结论:1.睾丸Thy1+胞外囊泡在体外抑制Sertoli细胞表达GDNF。2.在精母细胞和圆形精子细胞中特异性高表达的lncRNA5512缺失对雄性小鼠精子发生及生育力无显著影响。
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