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背景:胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在世界范围恶性肿瘤排第四位,死亡率居第二位,在我国,每年新发病例约为30万,严重威胁着国人健康,而转移是胃癌患者最常见的致死原因,其发生的分子机制一直是肿瘤研究领域的热点。微小RNA(micro RNAs,mi RNAs)是一大类内源性的、在进化过程中高度保守的单链非编码小RNA,参与了人体多种生命活动的调控,如细胞的增殖、分化、凋亡等。mi RNA的表达失调可导致多种疾病的发生,并且与多种恶性肿瘤的发生、发展有着极为密切的关系。近年来许多研究表明,在胃癌中也存在mi RNA表达失调的现象,说明mi RNA也参与了胃癌的发生。本实验将在前期的基础上,对mi R-29a-3p在胃癌细胞系的表达水平、生物学功能及可能的作用机制进行初步的研究和探讨。目的:探索hsa-mi R-29a-3p(mi R-29a)对胃癌腹膜转移的影响并初步研究其作用机制。方法:1.利用q RT-PCR验证mi R-29a-3p在三对胃癌高低转移细胞系GC9811-P/GC9811,MKN28-M/MKN-28NM,SGC7901-M/SGC7901-NM中的表达情况。2.构建过表达及抑制mi R-29a-3p的慢病毒表达载体,将过表达mi R-29a-3p的慢病毒及其无关阴性对照转染入胃癌腹膜高转移细胞系GC9811-P中,相反,将抑制mi R-29a-3p表达的慢病毒及其无关阴性对照转入亲本细胞系GC9811中。3.用MTT比色实验、平板克隆形成实验、Transwell、划痕实验及流式细胞学技术分别观察mi R-29a-3p对胃癌细胞的增殖、转移及凋亡能力的影响。4.采用生物信息学的方法预测mi R-29a-3p的靶基因,查阅文献选出与转移相关的基因并采用q RT-PCR及western blot验证与mi R-29a-3p的关系。5.转染si RNA及空载体沉默基因表达,进一步行功能试验验证其功能及是否为mi R-29a-3p的靶基因。结果:1.mi R-29a-3p在胃癌高转移细胞系(GC9811-P、MKN28-M、SGC7901-M)中高表达。2.成功构建高低表达mi R-29a-3p的细胞系,q RT-PCR验证转染成功。3.功能试验结果表明,过表达mi R-29a-3p可以抑制细胞的增殖及转移能力而促进细胞的凋亡能力;相反,抑制mi R-29a-3p的表达可以促进细胞的增殖及转移能力而抑制细胞的凋亡能力。4.生物信息学预测提示HAS3可能为mi R-29a-3p的潜在靶基因之一,q RT-PCR结果显示,在上调mi R-29a-3p的细胞系中,HAS3表达有降低的趋势但无统计学意义;在下调mi R-29a-3p的细胞系中,HAS3表达有升高的趋势但无统计学意义。Western blot结果显示,上调mi R-29a-3p的表达,HAS3表达下调,下调mi R-29a-3p的表达,HAS3表达上调。5.沉默HAS3的表达,胃癌细胞增殖及迁移能力减弱,说明HAS3促进胃癌细胞的增殖与转移。在高表达mi R-29a-3p的细胞系中沉默HAS3的表达后,细胞的增殖及转移能力减弱,与过表达mi R-29a-3p有类似的效果,说明mi R-29a-3p可负性调控HAS3,进一步证实HAS3可为mi R-29a-3p的潜在靶基因之一。结论:mi R-29a-3p抑制胃癌细胞的增殖与转移而促进凋亡,并可能通过其下游靶分子之一HAS3发挥其作用。