二十世纪七十年代以来,水产养殖的科技进步,推动了沿海养殖业的兴起。在十大水产品生产国中,中国居于首位。根据中国渔业统计年鉴数据,我国渔业经济总值逐年上升,并且养殖业占有巨大的比例。截至2016年,全国对虾养殖总产量达127.17万吨。但是,随着渔业的迅速发展,养殖过程中的疾病频发给整个虾类养殖产业带来了巨大的经济损失。目前,国内外虾类养殖中,危害最大的病毒是白斑综合征病毒,白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是一种无包涵体、具囊膜、一端有尾巴结构的杆状双链DNA病毒。WSSV宿主范围广、传染能力强、致死率极高,给全球不同虾类养殖业造成重创。鉴于没有适于WSSV增殖的对虾细胞系,WSSV致病机理及宿主的抗病毒免疫机制仍知之甚少。基于前期对虾白斑病毒(White spot syndrome virus,WSSV)感染红螯螯虾(Cheraxquadricarinatus)后的转录组数据分析发现,红鳌螯虾在感染 WSSV 12 h 后其 TRIM32(Tripartite motif-containing 32)显著上调。作为一种参与泛素化修饰的重要蛋白,TRIM32在甲壳动物抗病毒方面的功能暂不明确。TRIM是一类高度保守的蛋白,参与细胞增殖、分化、发育、凋亡、肿瘤抑制、细胞自噬和抗病毒免疫反应等等过程。其中,TRIM32的抗病毒功能越来越受到关注。而在无脊椎动物中,TRIM32是否也具有抗病毒功能暂未见相关报道。为了进一步表征CqTRIM32在红螯螯虾抗WSSV感染中的作用,我们克隆了CqTrim32的cDNA全长序列。多序列比对显示CqTrim32含有保守的RING-finger结构域,但没有B-BOX结构域和卷曲螺旋区结构域,这与传统的TRIM家族蛋白有所不同。系统发育树构建表明,CqTrim32是作为一个独立的分支,没有近缘关系的物种。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对健康红螯螯虾CqTrim32组织分布特征进行分析,结果显示,Trim32在不同组织器官均有不同程度表达,其中,在肌肉和神经中的表达量最高,Hpt组织中次之。红螯螯虾注射WSSV后,Hpt组织CqTrim32在24h和48h的表达量显著上调。同时,体外培养的Hpt细胞感染WSSV 12 h和24 h后,CqTrim32的mRNA转录水平显著上调;利用双链RNA干扰技术对Hpt细胞中的CqTrim32进行敲降,WSSV的早期表达基因IE1和晚期囊膜蛋白表达基因VP28的转录水平在6h显著上调。利用原核表达载体pMal-C2x进行蛋白表达和MBP beads进行亲和层析纯化,利用western-blot进行纯化后蛋白的鉴定,结果表明:成功表达并纯化pMal-C2x-TRIM32,可以用于后续的实验。在rCqTRIM32的重组蛋白转染实验中,在病毒感染6h时,病毒转录复制受到显著抑制,这进一步表明CqTRIM32在WSSV感染Hpt细胞的过程中发挥抗病毒作用。利用细胞免疫荧光技术检测了病毒感染后Hpt细胞泛素化的变化情况,结果表明在随着WSSV感染Hpt细胞的过程中泛素化的强度增加,与此同时,在CqTrim32干扰后检测其泛素化的强度,发现敲降CqTrim32细胞中的整体的泛素化水平降低,表明CqTRIM32参与了其泛素化的过程。Pulldown分析结果表明,CqTRIM32蛋白可以与WSSV囊膜蛋白VP28互作,这暗示CqTRIM32可能直接通过与病毒囊膜蛋白VP28直接相互作用,并介导泛素化过程来促进病毒的降解,是一种抑制病毒感染的关键因子。