【摘 要】
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红色糖多孢菌的次级代谢产物红霉素及其衍生物应用广泛,为提高红霉素产量和揭示相关代谢调控机制,越来越多的基因工程研究和改造技术应用于红色糖多孢菌。本论文研究了电击转
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红色糖多孢菌的次级代谢产物红霉素及其衍生物应用广泛,为提高红霉素产量和揭示相关代谢调控机制,越来越多的基因工程研究和改造技术应用于红色糖多孢菌。本论文研究了电击转化、结合转移、PEG介导的原生质体转化三种基因敲除方法,利用PEG介导的原生质体法成功实现了红色糖多孢菌中基因的敲除,获得了SACE0069, SACE0500, SACE1897, SACE3795四个基因敲除菌。SACE0069为链霉菌中负调控基因nsdA在红色糖多孢菌中的高度同源基因,其敲除菌与模式菌表型差异实验表明该基因在红色糖多孢菌孢子分化和红霉素合成方面有负调控作用。另外,转录组实验数据显示SACE0069敲除菌中表达差异倍数在两倍以上的基因有500多个,表达差异倍数在三倍以上的基因有120多个,这些基因涉及到能量代谢、糖代谢、氨基酸代谢等多条代谢途径。根据转录组实验数据进一步设计了凝胶阻滞实验,并得到了两个疑似靶基因SACE6415和SACE6240。本课题对SACE0069基因功能的研究,一定程度上为红霉素高产菌株的筛选提供了新的理论基础和研究靶位点,也为更好的了解红色糖多孢菌形态分化提供了新的思路。
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