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目的:骨肉瘤是一种临床上常见的原发恶性骨肿瘤,其发病率近年来呈逐渐上升趋势。目前常规治疗方法为化疗-手术-化疗综合性治疗,但其预后效果较差,五年生存率较低,约为60%-70%。我们急需在骨肉瘤的治疗方面取得突破性进展,以期为骨肉瘤患者的化疗和基因治疗提供实验依据和理论基础。本实验主要通过shRNA下调骨肉瘤细胞株的钙周期素结合蛋白(calcyclin binding protein/Siah-1-interacting protein,CacyBP/SIP)基因,观察其对人骨肉瘤细胞株SaOS-2增殖的影响,并探讨沉默CacyBP/SIP基因治疗骨肉瘤的可行性。方法:1培养U2OS、HOS、MG-63及Saos-2共4种人骨肉瘤细胞株,应用Real-time quantitative PCR(实时定量聚合酶链反应)方法检测CacyBP/SIP在不同骨肉瘤细胞株中mRNA的表达丰度。2单独培养人骨肉瘤细胞株Saos-2,应用shRNA慢病毒感染目的细胞,将培养获得的细胞分为shCACYBP组(shCACYBP慢病毒感染组)和shCtrl组(阴性对照病毒感染组)。3 Real-time quantitative PCR方法分别检测2组细胞株中CacyBP/SIP基因mRNA的表达量,探讨shCACYBP慢病毒感染Saos-2细胞株knock down效率的影响。4 Western blotting蛋白印迹法检测2组细胞株中CacyBP/SIP蛋白质的表达量,比较shRNA慢病毒感染Saos-2细胞株后对其CacyBP/SIP蛋白质表达的影响。5应用克隆形成实验检测2组细胞株在细胞培养板上的克隆形成计数,比较shRNA慢病毒感染Saos-2细胞株后对其克隆形成能力的影响。6 MTT比色法检测2组细胞株的细胞活力,比较shRNA慢病毒感染人骨肉瘤细胞株Saos-2后对其增殖能力的影响。结果:1 Real-time quantitative PCR方法检测CacyBP/SIP基因在U2OS、HOS、MG-63及Saos-2的AverageΔCt分别为4.71±0.103、3.56±0.075、3.80±0.070、4.22±0.110,CacyBP/SIP基因在4种骨肉瘤细胞株中均高丰度表达。2 Real-time quantitative PCR方法检测CacyBP/SIP mRNA在shCACYBP组与shCtrl组中的表达量,shCACYBP组(0.269±0.014)相较于shCtrl组(1.001±0.060)减少,有统计学意义(P<0.05)。3 Western blotting蛋白印迹法检测shCACYBP组与shCtrl组中CacyBP/SIP蛋白质的表达,sh CACYBP组中CacyBP/SIP蛋白质较于shCtrl组表达减少。4克隆形成实验检测shCACYBP组与shCtrl组中细胞克隆数分别为45±8、112±6,shCACYBP组克隆数与shCtrl组相比减少,具有统计学意义(P<0.05)。5 MTT比色法检测shCACYBP组与shCtrl组随着时间的变化,2组在酶标仪对波长490nm的光的吸收率及吸收率变化倍数均增加,与shCtrl组相比shCACYBP组细胞活力减低,具有统计学意义(P<0.05)。结论:1 CacyBP/SIP在U2OS、HOS、MG-63及Saos-2这4种骨肉瘤细胞株中均高丰度表达。2 ShRNA慢病毒感染Saos-2细胞株后可下调其CacyBP/SIP mRNA水平和蛋白质的表达。3 SaOS-2细胞中下调CacyBP/SIP的表达后可抑制SaOS-2细胞的增殖。4在SaOS-2细胞株中CacyBP/SIP具有促进肿瘤生长和增殖的作用,是一种癌基因。