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研究背景食管癌(Esophageal Cancer)是消化道最常见的恶性肿瘤之一,其全球发病率和死亡率分别占第8位和第6位;主要有腺癌(Esophageal Adenocarcinoma,EAC)和鳞状细胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)两种病理组织类型。在我国,ESCC占到90%以上,手术+放化疗综合治疗后的5年生存率仍非常低。因此,深入阐明食管癌发生发展的分子机制,对早期诊断、发现新的治疗靶点,改善预后具有重要意义。MicroRNA(miRNAs)是一类真核生物内源性非编码小分子RNAs,能负性调控下游靶基因,参与多种肿瘤的发生发展。MiR-23b-3p在胃癌、结直肠癌、软骨肉瘤、甲状腺滤泡癌、乳腺癌、神经胶质瘤、急性髓系白血病等多种肿瘤中表达异常,是非小细胞肺癌的非侵入性预后标志物,与大肠癌耐药密切相关。但miR-23b-3p在食管癌中的表达与作用机制未见报道。研究目的探讨miR-23b-3p及其靶基因早期B细胞因子3(early B-cellfactor 3,EBF3)在食管癌发生发展中的作用及其相关机制。研究方法1.实时荧光定量 PCR(Quantitative Realtime PCR,qRT-PCR)技术检测miR-23b-3p在6种食管鳞癌细胞系和正常食管上皮细胞系中的表达。在转染miR-23b-3p抑制剂后,采用MTT法、Transwell小室侵袭和转移实验检测其对食管鳞癌细胞TE1和TE10增殖、迁移和侵袭功能的影响。2.采用生物信息学方法、双荧光素酶报告基因测定、qRT-PCR、蛋白质免疫印迹技术(Western blot)预测并鉴定miR-23b-3p的下游靶基因。3.采用MTT法、Transwell小室侵袭和转移实验观察EBF3对TE1和TE10细胞株增殖、迁移和侵袭功能的影响。采用同样的实验方法观察共转染miR-23b-3p和EBF3对TE1和TE10细胞株增殖、迁移和侵袭功能的影响。4.实时荧光定量PCR法和免疫荧光染色法检测miR-23b-3p和EBF3对EMT 标记物(E-cadherin,β-catenin,N-cadherin 和 vimentin)表达水平的影响。研究结果1.与正常食管上皮细胞相比,miR-23b-3p在6种食管鳞癌细胞株中的表达显著升高。与对照组相比,在TE1和TE10细胞株中下调miR-23b-3p能显著抑制食管癌细胞增殖、侵袭和转移。2.生物信息学方法预测EBF3是miR-23b-3p的潜在靶点,双荧光素酶报告基因测定、qRT-PCR和蛋白质免疫印迹技术(Western blot)结果表明,EBF3是miR-23b-3p的下游靶基因。转染miR-23b-3p模拟剂后,EBF3的mRNA和蛋白表达水平明显降低,转染miR-23b-3p抑制剂后,EBF3的mRNA和蛋白表达水平明显升高。3.与对照组相比,转染EBF3能抑制TE1和TE10细胞的增殖、迁移和转移。与对照组相比,共转染miR-23b-3p和EBF3组细胞中EBF3的mRNA和蛋白水平均显著上升,且EBF3能逆转由miR-23b-3p促进的肿瘤细胞增殖、侵袭和转移。4.与对照组相比,转染miR-23b-3p模拟剂的肿瘤细胞中,上皮细胞标记物(E-cadherin、β-catenin)显著减少,而间质细胞标记物(N-cadherin、Vimentin)显著增加。转染EBF3的肿瘤细胞中,上皮细胞标记物显著增加,间质细胞标记物显著减少。研究结论本研究首次发现,在ESCC中miR-23b-3p的表达增高,可抑制EBF3的表达,进而促进ESCC细胞增殖、侵袭和转移以及EMT进程,这可能是ESCC发生发展的机制之一。