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背景与目的脓毒症(Sepsis)是主要由各种单一或混合型感染引起的一种全身性炎症反应综合症,脓毒症发生发展严重时可以导致多器官功能的衰竭、脓毒性休克甚至死亡。关于脓毒症的发病机制十分复杂,至今尚未阐明,在脓毒症发生的早期,机体感染部位可以迅速招募大量中性粒细胞,这些招募来的中性粒细胞可以通过吞噬病原微生物、脱颗粒释放各种蛋白酶等物质来达到杀灭细菌的作用。脂多糖(LPS)是革兰氏阴性杆菌细胞壁的重要组成成分,是革兰氏阴性杆菌所致的脓毒症时最重要的致病成分。作为外源性刺激因子LPS刺激中性粒细胞可以促进其释放大量的IL-6、白细胞三烯B4、活性氧的炎性介质,且LPS刺激的中性粒细胞可以在远处器官大量的浸润,而这是脓毒症时SIRS以远处器官损伤的重要原因。一氧化碳(CO)是一种无色无味的有毒气体,前期实验结果表明,CORM-2释放的CO可以显著的改善盲肠结扎并穿孔(CLP)小鼠以及LPS刺激小鼠的炎症反应,有效的保护其重要脏器的损伤,提高生存率。而对LPS刺激的中性粒细胞,CORM-2对其功能的调控尚无明确的报道。方法采集健康成年志愿者静脉血,采用Ficoll离心法分离健康成年人血液中中性粒细胞,采用随机数字表法随机分为对照组(CONTROL),内毒素(LPS)组,LPS+CORM-2(10μM)组,LPS+CORM-2(50μM)组,LPS+iCORM-2组。采用流式细胞术检测中性粒细胞的早期凋亡、活性氧的释放以及吞噬功能;采用流式细胞术以及Elisa方法检测中性粒细胞颗粒释放情况;采用琼脂糖凝胶细胞迁移模型检测中性粒细胞迁移能力;在荧光显微镜下计数中性粒细胞胞外诱捕网(NET)的数量;采用免疫蛋白印迹(WB)检测中性粒细胞胞内蛋白P38、ERK1/2、AKT的表达。结果和结论1.LPS刺激能明显促进中性粒细胞的早期凋亡、抑制中性粒细胞的迁移能力,而使用CORM-2干预后并不能明显调控LPS对中性粒细胞的早期凋亡以及迁移能力的影响。实验表明CORM-2对LPS刺激的中性粒细胞的早期凋亡以及迁移能力无明显的影响。2.LPS刺激能明显促进中性粒细胞颗粒的释放以及吞噬功能,而使用CORM-2干预后能明显的抑制LPS刺激中性粒细胞活性氧产生以及颗粒释放,并且可以进一步增加中性粒细胞的吞噬功能。实验表明CORM-2可以明显的保护LPS刺激中性粒细胞的以确保其能更好的发挥功能。3.LPS刺激并不能促进中性粒细胞胞外诱捕网的产生,而CORM-2干预能有效的促进LPS刺激中性粒细胞胞外诱捕网的产生。实验表明CORM-2可以明显的促进中性粒细胞捕获并杀灭细菌的能力。4.LPS刺激后中性粒细胞关键蛋白ERK1/2、P38、AKT的表达均发生了一定程度的上升,而使用CORM-2干预后ERK1/2、P38、AKT的表达得到了大幅度的上升。实验表明CORM-2改善LPS刺激的中性粒细胞功能可能与ERK1/2、P38、AKT有关。