Brg1在正常与疾病状态下眼表组织中的表达与功能研究

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背景:Brahma相关基因1(Brahma-related gene1,Brg1)是染色质重塑复合物SWI/SNF的ATP酶亚基之一,广泛存在于真核细胞中。以往的研究表明,Brg1结合复合物参与不同类型细胞的细胞周期控制、凋亡和细胞分化。到目前为止,没有关于眼表上皮细胞Brg1表达以及功能的报道。  方法:对小鼠、兔以及人眼表组织的Brg1表达和定位进行免疫荧光染色和蛋白质印迹检测。人角膜上皮细胞株(HCE),小鼠角膜上皮细胞系(TKE2),小鼠原代培养的角膜上皮细胞(mCEC)分别在DMEM/F12+10%FBS,KSFM,和CNT-20培养基中培养。兔角膜缘上皮细胞进行克隆培养。采用0.9mM Ca2+,10%FBS或Brg1 siRNA处理TKE2,探讨Brg1在角膜上皮细胞分化中的作用。另外,对翼状胬肉组织的Brg1表达进行免疫荧光染色及PCR检测。  结果:在小鼠出生后第0-7天,角膜上皮未见Brg1表达,第2周开始在角膜上皮基底层有少量细胞表达,第3周见阳性细胞扩展至基底上层,至第4周中央角膜上皮呈全层表达。角膜缘处均无表达。Brg1在人角膜缘上皮细胞基底层无表达,而在角膜缘上层、外周和中央角膜上皮细胞全层表达。在兔角膜缘和角膜组织中,Brg1呈现类似的表达模式。免疫荧光染色显示,TKE2细胞系、HCE细胞系和mCEC细胞核中均有Brg1表达,但在核中的表达分布不同。兔角膜缘上皮细胞克隆未见Brg1表达,而在原代培养的兔角膜缘上皮细胞和兔中央角膜上皮细胞中,Brg1均呈核表达。TKE2在0.9mM Ca2+或10%FBS诱导分化后,细胞中Brg1表达水平没有明显改变,但在细胞核中的分布方式发生变化。TKE2细胞转染Brg1 siRNA后,经过实时荧光定量PCR检测发现,Brg1表达水平下降,而p63、K14等干细胞特异性蛋白表达水平增高,同时与上皮细胞分化相关的转录因子Klf4表达水平降低。人及兔正常结膜组织只在上皮表层有少量Brg1表达,但翼状胬肉上皮层全层细胞高表达Brg1。  结论:Brg1可能与角膜上皮细胞的成熟和分化有关;也可能参与翼状胬肉的发生发展过程。
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