库尔勒香梨是新疆名优特产瓜果,因其独特的风味受到国内外消费者的亲睐。但近年来其外形色泽发生变化、口感降低、品质退化,严重威胁这一名优水果的生产和发展。据报道这种情况的发生与病毒病的发生存在一定关系。 2002年4月都业娟等从库尔勒采集香梨花瓣样品,分离获得香梨分离物（KRL-1）,根据寄主范围、血清学、电镜观察及RT-PCR方法鉴定,认为KRL-1为苹果茎沟病毒（ASGV）,但KRL-1在生物学症状上与国内外已报道的ASGV分离物存在很大差异,为此本论文以KRL-1总RNA为模板,采用RT-PCR技术,扩增外壳蛋白（CP）基因的cDNA片段,将其克隆到pMD18-T载体上并进行序列分析。结果表明:KRL-1 CP基因由714个核苷酸组成,编码237个氨基酸。KRL-1与ASGV其它分离物CP基因的核苷酸同源性为90%～93%,氨基酸同源性为94%～98%,由此进一步从分子水平上证实了KRL-1是苹果茎沟病毒。本研究在中国大陆首次报道了ASGV的完整CP基因序列,为该病毒的分子生物学检测方法的研究奠定了基础。 ASGV在果树上的潜隐感染较普遍,在果树体内浓度又很低,且一般不产生明显症状,必须采取特定的方法才能明确果树是否潜带此病毒。由于以往检测苹果茎沟病毒的指示植物法、血清学法及分子生物学方法存在不足之处,为此本研究再根据ASGV序列分析结果,找出各分离物外壳蛋白基因的保守序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,首次建立了ASGV的实时荧光RT-PCR检测方法。TaqMan-MGB探针3’端具有小沟结合分子（minor groove binde,MGB）提高了探针的Tm值,缩短了探针长度,解决了苹果茎沟病毒各分离物之间基因组变异较大、难以找到较长一致序列设计探针的困难。该方法的检测灵敏度比常规RT-PCR电泳检测高约10倍,在25μL反应体系中,Mg²⁺浓度为3.5mM,引物浓度为0.6μM,探针浓度为0.6μM,总RNA含量达到20pg就能通过实时荧光RT-PCR检测出来,这对于ASGV等在果树体内含量较低的病毒尤为适用。此方法快速、灵敏,整个检测过程完全闭管,无需PCR后处理。这为今后库尔勒香梨田间ASGV的检测提供依据,为无毒苗木生产奠定基础。