本课题的研究方向是,中药有效成份的分析和指纹图谱研究。以中药肉苁蓉为研究对象,建立了测定肉苁蓉中几种有效成份含量的方法。同时,采用高效液相色谱法对肉苁蓉的指纹图谱进行了初步的研究。课题的研究内容主要包括以下四个部分:1毛细管电泳法测定肉苁蓉中的甘露醇及其糖类物质;2毛细管电泳电化学检测法研究肉苁蓉多糖的单糖组成;3高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中的甜菜碱;4肉苁蓉的高效液相色谱指纹图谱研究。第一部分,采用毛细管电泳电化学检测法测定了肉苁蓉中的甘露醇及其几种糖类物质的含量。同时,研究了电极电位、运行缓冲液浓度、分离电压及进样时间等电泳条件对测定的影响。得到了最佳电泳条件:电极电位0.65 V(vs. SCE)、分离电压21 kV、电动进样6 s、运行缓冲液0.10 mol/L NaOH溶液。在此优化条件下,甘露醇、蔗糖、葡萄糖、果糖得到很好的分离。在1×10-5 mol/L~1×10-3 mol/L的范围内存在良好的线性关系,方法检测限低,回收率测定结果说明该法准确、可靠。对内蒙、甘肃、新疆三地产肉苁蓉的测定表明,不同产地的肉苁蓉药材中甘露醇、蔗糖、葡萄糖、果糖的相对含量不同,甘肃产肉苁蓉的甘露醇含量较高,新疆野生肉苁蓉的果糖含量丰富。此结果为肉苁蓉的合理利用及开发提供了有利的参考依据。第二部分,利用毛细管电泳电化学检测法研究了肉苁蓉多糖的单糖组成,比较不同种肉苁蓉粗多糖的单糖组成差异。采用超声提取、沸水抽提、Sevag法脱蛋白、乙醇沉淀等一系列步骤制备水溶性肉苁蓉粗多糖,将所得粗多糖在稀酸溶液中水浴100℃条件下水解。利用毛细管电泳-电化学检测研究水解液中单糖的种类及其相对组成。实验结果表明,肉苁蓉粗多糖由葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖、果糖等组成。不同种及天然与人工栽培的肉苁蓉粗多糖的单糖组成有明显差异。实验结果为肉苁蓉多糖结构的进一步研究奠定了理论基础。第三部分,建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中甜菜碱含量的方法。研究了色谱柱、流动相组成、蒸发光散射检测器参数等因素对甜菜碱测定的影响,得到了最优化的测定条件:色谱柱:Waters Spherisorb S5 NH2 (250 mm×4.6 mm i.d, 5μm);流动相:0.1 %三氟乙酸?甲醇=15?85(体积分数);检测器参数:漂移管温度,90℃;喷雾器温度,45℃;载气压力,16 psi。结果表明,方法具有精密度高、简便、快速的特点。采用该法对不同种肉苁蓉中甜菜碱含量的测定结果表明:管花肉苁蓉不含甜菜碱,因此,该法对于鉴别正品肉苁蓉和管花肉苁蓉具有一定的参考价值。第四部分,采用高效液相色谱法建立了不同产地肉苁蓉药材的指纹图谱。研究了流动相、梯度洗脱条件及检测波长的选择对肉苁蓉指纹图谱的影响,得到了优化的测定条件。色谱条件:色谱柱,NUCLEODUR 100-5 C18(250 mm×4.6 mm i.d, 5μm);流动相,甲醇?0.1 %三氟乙酸梯度洗脱;流速,0.6 mL/min;检测波长,243 nm。蒸发光散射检测器参数:漂移管温度,90℃;喷雾器温度,45℃;氮气压力,16psi。采用夹角余弦和相关系数的方法来计算肉苁蓉药材指纹图谱共有峰峰面积的相似度,并与混淆品锁阳进行比较。结果表明,锁阳样品与肉苁蓉样品的指纹图谱相似度存在很大差异。该法准确、可靠,可用于肉苁蓉药材的鉴别和质量控制。