论文部分内容阅读
目的:本研究旨在探讨GRP78si RNA干扰GRP78表达对体外培养的肝癌细胞株增殖、自噬和体外血管生成的影响及其作用机制,为探索有效抗肿瘤和抗肿瘤血管生成药物提供新靶点与新思路。方法:1.GRP78最佳si RNA筛选:设计合成si RNA转染体外培养肝癌细胞株MHCC97H,通过Western blot分析筛选出最佳干扰片段;2.实验分三组,即空白对照组(control group),阴性对照组(si Control group)和实验组(si GRP78 group);3.MTT法检测下调GRP78表达后肝癌细胞增殖活力变化;4.流式细胞仪检测下调GRP78表达后对肝癌细胞株huh7和SMMC7721细胞周期分布的影响;5.Western blot分析下调肝癌细胞GRP78表达后各组LC3-Ⅱ、CCND1、AKT、p-AKT蛋白表达变化;6.收集转染肝癌细胞培养基上清行体外血管生成实验:HUEVC平板克隆形成和划痕迁移检测GRP78对肿瘤微环境中血管生成的影响。结果:1.GRP78si RNA特异性下调肝癌细胞GRP78表达;2.下调GRP78表达可抑制肝癌细胞增殖;3.下调GRP78表达可诱导肝癌细胞阻滞在G0/G1期;4.下调GRP78表达可显著降低肝癌细胞周期蛋白CCND1的表达;5.下调GRP78表达可显著降低肝癌细胞自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达;6.下调GRP78表达可显著降低肝癌细胞AKT磷酸化水平;7.下调GRP78表达可显著抑制体外血管生成:HUEVC平板克隆形成和划痕迁移。结论:1.GRP78si RNA转染肝癌细胞能够特异性下调GRP78表达,并抑制细胞增殖,诱导huh7和SMMC7721细胞周期阻滞;2.下调huh7和SMMC7721细胞GRP78后可能通过影响PI3K/AKT信号通路和Cyclin D1表达,而诱导huh7和SMMC7721细胞周期阻滞;3.下调huh7细胞GRP78后,可显著抑制细胞自噬和体外血管生成。