【摘 要】
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目的:1.探讨磷酸化的c-Jun氨基末端激酶在大鼠脑缺血再灌注后脑组织中的表达。2.探讨应用JNK抑制剂SP600125后磷酸化c-Jun氨基末端激酶表达的变化。3.为JNK抑制剂成为缺血性
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目的:1.探讨磷酸化的c-Jun氨基末端激酶在大鼠脑缺血再灌注后脑组织中的表达。2.探讨应用JNK抑制剂SP600125后磷酸化c-Jun氨基末端激酶表达的变化。3.为JNK抑制剂成为缺血性脑血管病治疗的靶点进行铺垫。方法:健康清洁级成年雄性Wistar大鼠65只,体重240～270g,随机分为5组:正常对照组(3只)、假手术组(Sham group,3只)、缺血再灌注组(Ischemia reperfusion group,IR组3只)、缺血再灌注+二甲基亚砜组(Ischemia reperfusion+DMSO group,DM组28只)和缺血再灌注+二甲基亚砜+SP600125组(Ischemia reperfusion+DMSO+SP600125 group,SP组28只)。DM组及SP组随机分为缺血再灌注6h、12h、24h、72h四个亚组,每个亚组7只大鼠。采用Longa改良线栓法建立大鼠局灶性大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血后2h行再灌注。1.采用longa神经功能缺损评分标准观察大鼠神经行为学改变。2.采用TTC染色法观察梗死组织面积。3.采用HE染色法观察神经元的变化。4.分别采用免疫组化及免疫印迹法检测大鼠不同时间点脑组织中磷酸化c-Jun氨基末端激酶的表达。5.观察JNK抑制剂SP600125对磷酸化c-Jun氨基末端激酶表达的影响。结果:1.线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注模型成功率为75.6%。对照组及假手术组无症状,DM组神经功能缺损症状最重。再灌注6h～12h神经功能缺损症状明显,再灌注24h神经功能缺损症状有所恢复;再灌注72h神经功能缺损症状较6h～12h有明显改善。DM组与正常对照组及假手术组比较,神经功能评分差异有统计学意义(P﹤0.01)。SP组与DM组比较,再灌注6h～12h神经功能缺损评分差异有统计学意义(P﹤0.01),再灌注24～72h神经功能缺损评分差异无统计学意义(P﹥0.05)。2. TTC染色中正常对照组及假手术组均未发现病灶,IR组、DM组、SP组均发现大脑中动脉供血区梗死灶, SP组在再灌注各个时间点的梗死灶与DM组比较均减小,HE染色可见梗死区神经元细胞呈缺血坏死性改变。3.免疫组化研究显示:对照组及假手术组大鼠神经元、神经胶质细胞棕褐色染色阴性。DM组再灌注6h神经元、神经胶质细胞胞核呈棕褐色染色;再灌注12h胞核浓染,阳性细胞数增多;再灌注24h阳性细胞数减少;至72h阳性表达仍持续较高水平。SP组大鼠神经元、神经胶质细胞核为浅或中等程度棕黄色颗粒沉积,阳性细胞数较DM组减少(P﹤0.05)。4.免疫印迹研究显示:DM组再灌注6h脑组织p-JNK表达升高,在12h达高峰,24h表达略下降,72h仍有较高表达。SP组较DM组大鼠脑组织p-JNK表达水平显著降低(P﹤0.01),高峰不明显(P﹥0.05)。结论:实验结果表明,在大鼠脑缺血再灌注损伤后,p-JNK的活性呈时间依赖性增高,同时该作用可以被SP600125所抑制,提示JNK在缺血再灌注诱导的细胞凋亡过程中起正性调节作用,SP600125通过特异性抑制JNK活性而对神经元发挥保护作用,它可能可以作为缺血性脑损伤后的治疗靶点。
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