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目的建立10%血清诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的模型,从SIRT1/PML/AP-1信号通路的角度研究齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对血清诱导的VSMCs增殖的抑制作用。方法组织块贴壁法分离培养SD大鼠胸主动脉VSMCs;免疫荧光法鉴定VSMCs;乳酸脱氢酶(LDH)法检测OA(10、20、30、40、50、60μmol/l)的细胞毒性;CCK-8法检测血清(10%、20%)分别作用6 h、12 h、24 h后细胞的增殖率及OA(10、20、30 umol/L)分别处理6 h、12 h、24 h细胞的抑制率,实验设计为:正常对照组、10%血清模型组、OA药物组(10、20、30μmol/L)、氨基胍阳性对照组(AG,50 mmol/L)、SIRT1激活剂组(SRT1720,5 umol/L);RT-PCR技术检测SIRT1、PML、c-fos、c-jun m RNA表达水平;Western blot技术检测10%血清与VSMCs共孵育的经时(0、3、6、12、24、48 h)变化、预给药OA(10、20、30μmol/L)12 h细胞内SIRT1、PML、c-fos、c-jun蛋白表达水平的变化;首次采用RNA干扰技术,观察沉默PML对c-fos、c-jun蛋白表达的影响,将实验分为6组:PML-si RNA组、正常组、Scr-si RNA组、10%血清模型组、Scr-si RNA+10%血清组、PML-si RNA+10%血清组;采用SPSS17.0软件进行统计学分析。结果VSMCs呈典型的“峰谷样”生长,VSMCs中α-actin肌动蛋白阳性表达,纯度达98%以上,证实成功分离并培养血管平滑肌细胞。40 umol/l OA对细胞有毒性作用(P<0.05)。10%血清处理12 h后细胞增殖较正常组显著上升(P<0.05),综合确定10%血清作用12 h复制增殖模型。与模型组相比,AG和OA(10、20、30 umol/L)预孵育12 h、SRT1720预孵育6 h对VSMCs有明显的抑制作用(P<0.05),各剂量OA的抑制作用呈剂量依赖性。模型组SIRT1 m RNA表达水平较正常组显著降低(P<0.05),PML、c-fos、c-jun m RNA表达水平显著上升(P<0.05),各剂量OA组中SIRT1m RNA表达水平均较模型组显著升高(P<0.05),PML、c-fos、c-jun m RNA表达水平显著降低(P<0.05)。3、6、12、24、48 h的SIRT1蛋白表达量较0 h均显著降低,12 h达到最低(P<0.05),PML、c-fos、c-jun蛋白经时表达水平较0 h均升高,12 h达到最高(P<0.05)。模型组SIRT1蛋白水平较正常组显著降低(P<0.05),PML、c-fos、c-jun蛋白水平显著上升(P<0.05);OA组、AG组及激活剂组SIRT1蛋白表达水平较模型组显著上升(P<0.05),PML、c-fos、c-jun蛋白水平显著下降(P<0.05)。与模型组相比,PML-si RNA组PML、c-fos、c-jun蛋白水平显著下降(P<0.05)。结论10%血清可以诱导VSMCs增殖;OA是通过SIRT1/PML/AP-1信号通路抑制VSMCs增殖而产生抗动脉粥样硬化作用。