siRNA-Id-1对肝癌HepG2细胞增殖的影响与ERK信号通路调控的实验研究

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目的:观察siRNA-Id-1对肝癌细胞系HepG2细胞增殖的影响,研究Id-1促进肝癌细胞增殖与细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal regulated protein kinase,ERK1/2)信号转导途径的关系,探讨ERK1/2信号通路在肝癌HepG2细胞增殖中的作用。方法:针对Id-1mRNA序列设计合成编码siRNA的DNA模板,构建siRNA-Id-1重组质粒,转染HepG2细胞,实验分成四组:siRNA-Id-1组、阴性对照组、脂质体组和空白组;分别用反转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转染后Id-1、ERK1/2mRNA与蛋白的表达;噻唑蓝比色法(MTT)观察细HepG2细胞胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期特征。结果:第一部分:HepG2细胞转染siRNA-Id-1后24小时,蛋白免疫印迹显示siRNA-Id-1组Id-1、ERK蛋白的表达较其他三组组明显减弱。RT-PCR显示siRNA-Id-1组Id-1、ERK1/2mRNA表达明显降低,与阴性对照组、脂质体组和空白组比较,差别具有统计学意义(P<0.01)。第二部分:1、MTT法测得HepG2细胞增殖结果显示:转染siRNA-Id-1的HepG2细胞增殖速度明显减慢( P<0.05),24小时时细胞增殖抑制率最高;对照组、脂质体组和空白组三组之间细胞的增殖情况的差异无显著性差异(P>0.05)。2、流式细胞周期仪结果:siRNA-Id-1干预组细胞G1期(DNA合成前期)细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少;与空白组、空脂质体组及阴性对照组相比,均具有统计学意义(P<0.05)。结论:第一部分:siRNA-Id-1转染HepG2细胞后,沉默Id-1蛋白表达,同时ERK1/2基因表达活性也下降,且两者的活性呈同步改变,提示Id-1,ERK1/2在肝癌HepG2细胞增殖中的表达有一定的相关性;第二部分:通过siRNA干扰技术可抑制肝癌细胞增殖,减缓肝癌进程,而细胞增殖的抑制和调控和Id-1、ERK1/2蛋白活性的下调有密切的关系,提示Id-1有可能通过ERK1/2信号转导通路介导,加速肝细胞癌HepG2细胞的周期进程,促进肝癌细胞的增殖;Id-1激活ERK1/2信号转导通路可能是肝癌发生发展过程的重要原因。
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