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细胞介导的细胞毒是对抗细胞内病原体和肿瘤免疫排斥的主要途径,是维持免疫系统内环境稳定的重要机制。这个过程可以通过不同类型的细胞介导,诱导靶细胞的死亡。NK 细胞在机体抗肿瘤,抗感染及免疫调节中起着重要作用,并参与自身免疫病,Ⅱ型超敏反应,移植排斥反应等免疫病理过程[1]。因此,NK 细胞毒活性的测定在基础理论研究和临床实践中均具有重要意义。传统检测NK 细胞毒活性的方法是Cr 释放实验[2],虽然这种方法重复性好,操作简单,但它仍有几个缺点如标记的细胞Cr 自发释放率高;细胞杀伤的实际情况和Cr 标记的细胞内蛋白释放入上清液有时间延迟;在总体水平检测细胞的裂解,而不是在单细胞水平上;需处理放射性同位素等等。尚有一些酶法检测粒酶A 的脂酶活性[3],或靶细胞的代谢功能[4],这些方法同样存在假阳性等问题。流式细胞术检测细胞毒的方法基于单细胞水平,克服了上述方法的缺陷,实验原理是先用第一种荧光染料标记靶细胞,用以区分效应细胞和靶细胞。再用第二种DNA 荧光染料来区分膜已破坏的靶细胞并计算其百分比。然而,有时第一种荧光染料的泄漏导致细胞间的交叉污染,因此选择一种稳定的荧光染料是至关重要的。CFDA-SE 是一种不带电的荧光素衍生物,可以渗透入细胞膜,裂解为带电荷形式,共价结合到细胞内蛋白,稳定地停留在细胞中并产生一个荧光信号。CFDA-SE 自从1994 年应用于检测淋巴细胞增值实验以来,已经广泛应用于免疫学的各个领域,但染料的特性和标记细胞的条件还不完善,为使CFDA-SE 更好地应用于检测细胞毒的方法,本实验研究了CFDA-SE 的特性及标记细胞的条件。我们通过检测CIK,人PBMC 和BALB/c 鼠脾淋巴细胞杀伤靶细胞的实验,建立了CFDA-SE/PI 双标记的流式细胞术检测细胞毒方法。