脐血造血细胞的冻存与归巢研究

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目的:研究冻存过程对脐血造血细胞细胞表型和生物学功能,以及对与归巢密切相关的组成细胞骨架的肌动蛋白actin的影响,为建立脐血库提供理论和实验依据。方法:用单抗鉴定细胞表型,通过流式细胞仪及荧光显微镜检测冻存前后单个核细胞中各亚群的比例,并用~3H-TdR掺入、集落形成方法研究冻存前后细胞的增殖能力、集落形成能力的变化。继而,通过荧光染色法及Western-blot方法对肌动蛋白的分布和表达情况进行了比较。在体外扩增的研究中,通过早期造血细胞标志物的检测比较脐血单个核细胞在造血因子或贴壁细胞层上生长的情况。结果:冻存后所测细胞亚群比例无明显差异,集落形成细胞为冻存前的70.56%,但冻存后肌动蛋白的细胞内分布及表达量有所改变,经短期细胞因子孵育,可恢复正常。含有IL-3、IL-6和GM-CSF的培养扩增体系对脐血细胞的早期扩增影响显著,一周内CD34~+细胞比例升高至4.7%,而脐血贴壁细胞对脐血细胞的晚期扩增作用明显,第四周CD34~+细胞比例仍然升高。结论:冻存基本上不会损失造血细胞及其生物功能,经较短期孵育的冻存脐血保持良好的归巢能力和集落形成能力,脐血贴壁细胞对脐血造血细胞的长期扩增作用较优。
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