论文部分内容阅读
目的:分离、扩增并鉴定兔脂肪间充质干细胞(ADSCs)和骨髓间充质干细胞(BMSCs);建立鼠腰椎间盘退变的模型;观察移植的干细胞能否在退变的椎间盘内存活及增殖,探讨这两种间充质干细胞移植对兔退变椎间盘的作用的比较。方法:①分别采用胶原酶消化法与全骨髓培养法加贴壁法分离纯化兔脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测ADSCs及BMSCs细胞的表面标志,MTT法检测ADSCs及BMSCs的生长动力学。②采用髓核抽吸法建立兔椎间盘退变模型。③将BrdU标记的ADSCs及BMSCs移植于退变的兔椎间盘中,在术后2、4、8周行MRI检查后,处死实验动物,取材,行HE染色观察兔退变椎间盘内的修复情况,BrdU免疫组化染色观察细胞在退变椎间盘内的存活及增殖情况,间苯三酚法检测蛋白多糖含量的变化情况。结果:①兔ADSCs及BMSCs体外分离纯化培养,增殖迅速,短时间内可以获得足够的种子细胞数量;流式细胞仪检测ADSCs及BMSCs的表面抗原均为CD29阳性,CD45阴性;MTT法检测显示ADSCs及BMSCs增殖能力较强,消化传代后的第3代细胞经过潜伏期、对数生长期,然后过渡到平台期。②髓核抽吸法可以成功的建立椎间盘退变的动物模型。③术后2、4和8周,MRI检查显示,3组椎间盘都出现退变表现,椎间隙变窄,T2加权相上椎间盘信号变低。但ADSCs移植组与BMSCs移植组的椎间盘退变比缺损退变组退变的程度较轻。④移植的ADSCs和BMSCs在缺损椎间盘中持续存在,细胞被5-BrdU标记。2周时阳性细胞数量较多,8周后阳性细胞数量较少,并且随着时间的推移,阳性细胞由中央区域向外周迁移。⑤HE染色显示ADSCs及BMSCs在退变椎间盘内可以存活和增殖,并能够保持椎间盘的组织结构。⑥ADSCs移植组和BMSCs移植组中的蛋白多糖明显比缺损退变组的含量多,并且差异有显著差异(P<0.05)。结论:①胶原酶消化法和全骨髓培养法可以成功的分离获取脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞;②髓核抽吸法可以诱导椎间盘退变;③移植于兔退变椎间盘内的兔ADSCs及BMSCs能够存活,并且有增殖能力,可以延缓椎间盘的退变及促进退变椎间盘的修复,在退变椎间盘的组织生物工程中,ADSCs及BMSCs均可以做为理想的种子细胞;但ADSCs分离成功率比从骨髓中分离间充质干细胞要高,因此,ADSCs有替代BMSCs的可能。