MiR-708对视网膜色素上皮细胞氧化损伤的作用的研究

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目的:MicroRNA是一类小的非编码RNA分子,在基因表达过程中可以起到RNA沉默以及转录后调节的作用。本实验的目的在于研究miR-708在人视网膜色素上皮细胞受氧化损伤后的表达改变,以及其对视网膜色素上皮细胞的生存以及基因表达的影响。方法:向培养的ARPE-19细胞系内转染miR-708模拟物或抑制物。将ARPE-19细胞暴露于不同浓度H2O2中模拟氧化损伤。随后,通过CCK-8测试检测细胞活力,通过ROS流式细胞分析检测细胞内活性氧水平,通过Hoechst 33342/PI染色荧光显微镜观察及Annexin V-FITC/PI流式细胞分析细胞凋亡及坏死情况,通过聚合酶链式反应检测miR-708及其目标基因表达的改变。结果:ARPE-19细胞在受到H2O2刺激后,miR-708表达水平显著上升,细胞活性下降,细胞内ROS水平升高,细胞的凋亡、坏死水平升高;加入miR-708抑制剂可以使H2O2诱导的细胞活性下降趋势改善,ROS水平降低,细胞的凋亡、坏死减少。MiR-708在ARPE-19细胞中,降低了BMI1等多个与减少ROS生成相关的mRNA的表达水平。结论:MiR-708可能通过调节ROS相关基因加重RPE细胞受氧化应激损伤,miR-708抑制物可能是年龄相关性黄斑变性等视网膜退行性疾病的新治疗靶点。
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