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目的:通过建立新西兰大白兔阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(Obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS)的动物模型,研究OSAHS对颏舌肌(genioglossus,GG)功能结构的影响,探讨下颌前移矫治器(mandible advanced device,MAD)治疗后GG的改变。为临床研究MAD治疗OSAHS对GG的影响提供理论依据。
方法:
动物分组:30只纯种新西兰大白兔,6月龄,雄性,随机分为3组,每组10只,分别为阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征组(Group OSAHS)、下颌前移矫治器组(Group MAD)和对照组(control group)。
模型建立:OSAHS组和MAD组实验动物均于1%戊巴比妥钠行全身麻醉后,在软腭中距软硬腭交界0.5cm处粘膜下肌层注射聚丙烯酰胺水凝胶1-2ml。注射后,动物仰卧位出现明显打鼾和间断的呼吸暂停,头颅侧位片显示软腭后缘1/4点、1/2点、3/4点处上气道宽度较对照组明显减小,发生睡眠呼吸暂停时动脉血气分析显示血氧饱和度较对照组降低了22%,上述表明OSAHS动物模型建立成功。
MAD组在建模成功后,取印模,制作并配戴上前牙斜面导板矫治器,导下颌向前。
睡眠观察:建模2天后,三组动物每天上午以5-6ml/kg剂量经口灌注10%水合氯醛,仰卧位睡眠4-6小时,持续8周。
上气道间隙测量:分别对三组动物拍仰卧位头颅侧位片进行上气道间隙分析,取软腭后缘最上点、1/4点、1/2点、3/4点和最下点的五个位点,进行上气道间隙测量。
动脉血气分析:仰卧位睡眠发生呼吸暂停时,分别抽取三组动物耳缘动脉血1ml进行血气分析。
体外收缩能力测量:8周后,三组动物在1%戊巴比妥钠全麻下,暴露并分离颏舌肌,迅速剥离并制备成直径2mm的纵向肌条,肌条一端结扎固定在浴槽底部固定钩上,另一端与高度敏感的张力换能器相连,悬挂于恒温37℃含95%O2和5%CO2的生理溶液浴槽里,pH值调至7.40。平衡30分钟后,由铂电极产生刺激,测量单收缩的最大收缩张力、收缩时间、半舒张时间、刺激频率分别为10Hz、20Hz、40H、60Hz、80H、100H时的张力-频率关系。休息10分钟后,进行颏舌肌诱导疲劳试验,给予0.5Hz的连续刺激,持续时间5分钟,每间隔1分钟记录持续时间为300毫秒单刺激下的肌张力。
肌纤维型测定:取5mm×5mm×3mni大小颏舌肌组织,立即置于异戊烷/液氮中快速冷冻,-80℃储存备用。用ATP酶染色(钙钴激活法)进行Ⅰ、Ⅱ型肌纤维型测定。
软腭HE染色:取下凝胶注射部位软腭组织,固定于10%福尔马林中,石蜡切片,常规HE染色,光学显微镜下观察。
统计学处理:所有数据均采用SPSS13.0统计软件包进行统计分析,检验水准为α=0.05。
结果:
1.上气道间隙测量:OSAHS组软腭后1/4点、1/2点和3/4点上气道间隙均较MAD组、对照组明显减小,差别有统计学意义(P<0.05);MAD组与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05)。
2.血气分析:OSAHS组较MAD组、对照组的血氧饱和度、氧分压和pH值均显著降低,差别有统计学意义(P<0.05),二氧化碳分压较MAD组、对照组显著升高,差别有统计学意义(P<0.05);MAD组较对照组比较以上各项指标均无显著性差异(P>0.05)。
3.体外收缩能力:三组间颏舌肌单收缩的最大收缩张力,收缩时间,半舒张时间没有显著差异(P>0.05),三组间颏舌肌的张力-频率关系也没有显著差异(P>0.05),但在疲劳试验过程中,OSAHS组在1min、2min、3min、4min、5min时GG收缩张力与初始张力比值分别为88.20±4.80%、64.80±6.58%、57.30±4.24%、37.10±3.38%、28.30±3.50%,MAD组在1min、2min、3min、4min、5min时GG收缩张力与初始张力比值分别为94.30±3.33%、83.10±3.51%、71.60±4.01%、55.40±2.95%、45.70±6.27%,对照组在1min、2min、3min、4min、5min时GG收缩张力与初始张力比值分别为98.80±7.33%、87.70±4.50%、74.20±4.99%、52.00±5.10%、48.20±4.10%,OSAHS组较对照组颏舌肌易疲劳性明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。而MAD组与对照组比较,颏舌肌疲劳性无显著性差异(P>0.05)。
4.肌纤维分型:光学显微镜下观察,100倍物镜下纤维计数显示OSAHS组Ⅱ型纤维(易疲劳性纤维)比例为85.64±3.03%,较对照组Ⅱ型纤维(易疲劳性纤维)比例78.70±3.34%增高,差异有统计学意义(P<0.05),而对照组与MAD组(80.21±2.07%)之间没有显著性差异(P>0.05)。
5.血氧饱和度与颏舌肌疲劳性相关分析:二者在各时间点均呈明显的正相关,其中在疲劳实验中的第2分钟时相关系数最大,r=0.773,P<0.001,具有统计学意义。
6.软腭组织学观察:肉眼观察软腭凝胶注射部位,呈白色透明状,质韧且有弹性,边界清楚,未见向周围组织扩散,白色胶状物外有完整包膜。光镜下可见凝胶蓝染,呈交联状,有纤维膜包绕,没有引起周围组织炎症、坏死等不良反应,也未见对邻近组织的损伤。
结论:OSAHS可导致GG疲劳性增加,下颌前移矫治器治疗OSAHS,能预防颏舌肌功能结构的损伤。