P-Akt和caspase-3参与远程创伤预处理脑保护作用

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目的:  采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型探讨远程创伤预处理(remote preconditioning of trauma,RPCT)对脑缺血再灌注损伤的影响,研究p-Akt和caspase-3在远程创伤预处理脑保护机制中的作用。  方法:  (一)70只健康雄性SD大鼠,体重250~300g,随机分成七组(n=10):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、RPCT0.5h组、RPCT1h组、RPCT2h组、RPCT4h组和RPCT24h组。用以测定脑梗死容积及神经功能缺损评分。(二)40只健康雄性SD大鼠随机分成四组(n=10): Sham、I/R组、RPCT1h组和RPCT24h组。用以组织形态学、免疫组化及Western Blot法检测。①Sham组:仅分离大鼠颈部血管,不插入拴线阻塞大脑中动脉。②I/R组:采用Longa线栓法制作MCAO模型方法建立局灶性脑缺血再灌注模型。③RPCT组:在MCAO开始前分别0.5h、1h、2h、4h和24h做2cm腹部正中切口并切开腹壁全层,随即缝合伤口。各组大鼠均于缺血再灌注后观察24h,在24h对大鼠行神经功能缺损评分;行TTC染色法测定脑梗死容积;HE染色法观察脑组织形态;Nissl染色法观察神经细胞存活情况;免疫组化及Western Blot法观察并测定缺血半影区Akt、p-Akt及caspase-3蛋白的表达。  结果:  ①TTC染色:Sham组未见脑梗死;与I/R组比较,RPCT1h组、RPCT2h组、RPCT4h组及RPCT24h组脑梗死容积显著减小(P<0.05),RPCT0.5h组与I/R组脑梗死容积无显著差异(P>0.05)。②神经功能缺损评分:RPCT1h组、RPCT2h组、RPCT4h组和RPCT24h组Garcia评分较I/R组显著提高(P<0.05),RPCT0.5h组与I/R组Garcia评分无显著差异;各组Longa五分制评分无显著差异(P>0.05)。③HE染色:Sham组大鼠大脑皮质神经元形态正常;与I/R组相比, RPCT1h组及RPCT24h组缺血半影区神经元数目较多,层次较清楚,细胞形态较完整,细胞间质水肿减轻;I/R组、RPCT1h组及RPCT24h组缺血中心区均出现细胞坏死,神经元数目减少,核固缩深染,组织疏松。④Nissl染色:Sham组大脑皮质神经元形态正常;与I/R组相比,RPCT1h组及RPCT24h组缺血半影区存活神经元数量显著增加(P<0.05)。⑤免疫组化及Western Blot结果:Akt在缺血半影区表达稳定,各组间无统计学差异(P>0.05); I/R组、RPCT1h组及RPCT24h组p-Akt蛋白和caspase-3蛋白在缺血半影区的表达均显著高于Sham组(P<0.05);与I/R组相比,RPCT1h组及RPCT24h组缺血半影区的p-Akt表达显著增加(P<0.05),而caspase-3表达显著减少(P<0.05)。  结论:  远程创伤预处理能够减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,其机制可能与激活Akt蛋白、抑制caspase-3表达有关。
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