内生真菌对葡萄花色苷的影响与机制研究

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本研究主要以葡萄(Vtis vininera L.cultivar:Gamay)果肉愈伤组织和葡萄叶片内生真菌为试验材料,分别构建了内生真菌与葡萄细胞接触和对峙培养两种类型的共培养体系。通过分析与不同内生真菌菌株或菌株萃取物共培养后葡萄细胞的生长、花色苷的含量和组成、关键基因表达量等,探讨内生真菌对葡萄花色苷的影响及其可能机制。主要研究结果如下:1.与多数内生真菌接触共培养(CC:contact co-culture)显著抑制葡萄细胞的生长和总花色苷(Totalanthocyanins,TA)含量;而将近50%的供试内生真菌菌株与葡萄细胞非接触对峙共培养(DC:dual co-culture)提高了葡萄细胞TA含量。其中内生真菌XHYN-2(Alternaria alternata)和R2-21(Epicoccum sp.)显著(P≤0.05)提高了葡萄细胞TA含量。与内生真菌XHYN-2、R2-21和B2-17(Alternariasp.)对峙培养后,特异性的改变了葡萄细胞中花色苷的组分和相对含量。表明内生真菌具有调控葡萄颜色和稳定性的潜在应用价值。荧光定量PCR结果发现内生真菌处理后花色昔合成途径中结构基因VvCHS2、VvF3’5’H、VvF3,H1、VvUFGT受到不同程度下调或不受影响,而调节基因VvMybA1转录水平被不同程度上调。表明内生真菌对葡萄细胞花色苷合成的影响主要通过调控上游转录因子的表达来实现。2.使用便携式紫外-可见光荧光仪(Multiplex ResearchTM,FORCE-A)跟踪分析结果发现,与内生真菌对峙培养不同时间的葡萄细胞花青素指数(ANTH-RG)均受到促进作用;在整个培养期间葡萄细胞的花青素指数呈先上升后下降趋势,且对峙培养的第三天达到峰值。此外,与内生真菌XHYN-2、R2-21和B2-17对峙共培养期间的葡萄果实ANTH-RG也均被提高,说明除细胞水平外内生真菌对葡萄花色苷的影响也表现在葡萄果实层面。3.在培养基中添加不同浓度的内生真菌水萃取物对葡萄细胞TA含量具有不同程度的影响,并表现出明显的剂量效应。其中随着内生真菌XHYN-2水萃取物浓度的提高,对葡萄细胞TA含量的促进作用逐渐增加,与浓度为4 mg/L的水萃取物共培养6天,葡萄细胞TA含量的增加达到极显著(P≤0.01)水平。而随着内生真菌R2-21水萃取物浓度的提高,对共培养葡萄细胞TA含量的促进作用逐渐减小。而低浓度R2-21萃取物(2 mg/L和1 mg/L)处理9天对葡萄细胞TA含量具有极显著促进作用。
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