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目的:本实验通过建立刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠自身免疫性肝炎模型,观察姜黄素与二至丸联用对刀豆蛋白A诱导的小鼠免疫性肝炎的保护作用,并探讨姜黄素和二至丸联用对小鼠免疫性肝炎的免疫调节机制。方法:选用BALB/c雄性小鼠,随机分为五组:正常组、ConA模型对照组、二至丸组(160mg/kg)、姜黄素组(30mg/kg)、二至丸(160mg/kg)+姜黄素(30mg/kg)组。正常组和给药组每只小鼠灌胃0.5%CMC-Na溶液,剩余给药组每只小鼠灌胃相应的药物。灌胃3个星期后,给药组和给药组小鼠尾静脉注射ConA(20mg/kg),记录小鼠的死亡率,并分别于10h和24h分批处死小鼠,收集血清和肝脏组织。检测血清谷草转氨酶(aspirate aminotransferase,AST)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)水平;苏木精—伊红染色法(hematoxylin and eosin,HE法)观察肝脏组织的病理学改变;原位末端凋亡法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate(dUTP)nick-end-labeling,TUNEL)观察肝内细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)测定肝组织中细胞因子(IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ)水平变化;实时荧光定量PCR法检测肝内IL-6、IFN-γ、IL-10 mRNA的表达情况;蛋白印迹法(Western Blot)检测肝内相关蛋白水平(phosphorylated p65,p65,nuclear factor(erythroid-derived 2)-like 2(Nrf2),caspase3,cleaved caspase3)变化。结果:(1)与ConA模型对照组相比,二至丸联合姜黄素组小鼠血清中AST水平在8h和24h时间点均有所下降(P<0.05);而ALT水平仅在24h时间点有所下降(P<0.05)。镜检发现二至丸+姜黄素组小鼠肝细胞的坏死现象和炎症细胞浸润程度较ConA模型组明显减轻。(2)Elisa结果显示二至丸联合姜黄素组小鼠血清中炎性细胞因子水平(IL-4、IL-6、IFN-γ)较ConA模型组均有显著下降(P<0.05)。(3)RealtimePCR结果显示,与ConA模型对照组相比,二至丸联合姜黄素组小鼠肝脏内IL-6和IFN-γ上调以及IL-10下调的现象被明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)Western Blot结果显示,给予ConA后,NF-κB和Nrf-2信号通路同时被激活,二至丸+姜黄素组小鼠明显抑制了NF-κB的磷酸化和Nrf-2蛋白水平的下调,从而起到抗炎、抗氧化作用;同时还减少caspase-3的活化,降低肝细胞凋亡率。结论:在ConA诱导的小鼠自身免疫性肝炎模型中,二至丸和姜黄素联用可通过减少血清和肝脏中炎性细胞因子的释放,减少肝细胞坏死,阻碍NF-κB和Nrf-2信号通路的激活,进而起到免疫调节作用,保护肝脏。