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目的探讨菊花中六种黄酮类单体对H2O2诱导的人ARPE-19细胞损伤的干预作用及金合欢素减轻H2O2诱导的ARPE-19细胞损伤的机制,在动物实验层面验证金合欢素减轻碘酸钠诱导的大鼠视网膜损伤的作用。方法体外培养人视网膜ARPE-19细胞,MTT实验检测六种黄酮类单体(金合欢素、槲皮素、芹菜素、木犀草素、香叶木素、黄芩素)对ARPE-19细胞的增殖作用及对H2O2诱导的ARPE-19细胞凋亡的影响,FRAP法检测六种黄酮类单体的总抗氧化能力,流式细胞仪检测金合欢素对H2O2诱导的ARPE-19细胞的超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、细胞凋亡的影响,QPCR检测金合欢素对H2O2诱导的ARPE-19细胞凋亡通路相关因子mRNA表达,Western Blot检测金合欢素对H2O2诱导的ARPE-19细胞凋亡通路相关因子蛋白的表达。体内实验建立碘酸钠诱导的大鼠急性视网膜损伤模型。将SD大鼠随机分为5组:正常组、盐水组、模型组、金合欢素0.2um/ml组、金合欢素0.4um/ml组。在造模前3天经玻璃体腔穿刺给药右眼分别注入对应浓度的金合欢素和0.9%生理盐水。3天后造模,盐水组、模型组、金合欢素0.2um/ml组、金合欢素0.4um/ml组大鼠经舌下静脉注射40mg/ml碘酸钠(NaIO3)1ml。7天后处死大鼠,收集右眼组织标本。运用RPE铺片、HE染色、TUNEL染色检测视网膜组织的改变。结果MTT实验检测发现六种黄酮类单体对人ARPE-19细胞均有促进增殖作用;金合欢素、槲皮素、木犀草素对H2O2诱导的ARPE-19细胞有抗凋亡作用,槲皮素与金合欢素联合使用可以增强抗凋亡作用。总抗氧化能力:槲皮素、黄芩素、木犀草素组高于对照组,差异有统计学意义。SOD活力:单体组SOD活力高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义;不同浓度的金合欢素作用后,SOD活力随着剂量的增高而降低。ROS水平:槲皮素、黄芩素、木犀草素、金合欢素、芹菜素组高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义;不同浓度的金合欢素作用后,ROS的产量随着剂量的增高而降低。流式细胞仪检测金合欢素处理H2O2诱导的ARPE-19细胞后,细胞凋亡减少,在1uM浓度时细胞凋亡最少。QPCR检测发现金合欢素处理后cleaved caspase-3、PEDF、VEGF表达下降,Nrf2表达呈剂量依赖性增加。Western Blot检测发现金合欢素处理后BAX表达下降,Bcl-2、Bcl-2/BAX比值、caspase9、Nrf2呈剂量依赖性增加。RPE铺片发现模型组、盐水组、金合欢素组出现细胞核凋亡、融合,结构紊乱,细胞间隙增大,金合欢素组核溶解较小。HE染色发现模型组、盐水组、金合欢素组结构紊乱,外核层、内核层胞核排列不规则,模型组与金合欢素组相比改变明显,金合欢素组胞核排列较整齐。TUNEL染色后,发现盐水组、模型组凋亡细胞数明显增多,金合欢素组与模型组相比进一步减少。结论1.金合欢素、槲皮素、香叶木素、木犀草素、芹菜素、黄芩素有抗氧化作用,金合欢素、槲皮素、木犀草素有抗凋亡作用,这六种单体可以保护H2O2诱导的ARPE-19细胞的氧化损伤,其中金合欢素的作用最强。2.金合欢素可以减轻H2O2刺激ARPE-19细胞引起的氧化应激反应,修复氧化应激受损的ARPE-19细胞,减少H2O2刺激ARPE-19细胞引起的细胞凋亡,抑制ARPE-19细胞凋亡通路相关因子的表达,维持了细胞稳态。金合欢素通过抗氧化、抗凋亡作用保护H2O2刺激ARPE-19细胞引起的氧化损伤。3.金合欢素作为抗氧化剂可以抑制血管生长因子的分泌。4.金合欢素减轻NaIO3诱导的RPE细胞坏死,减少RPE凋亡,对急性视网膜损伤后的形态学改变有明显的保护作用。