目的：H22、S180是两种应用广泛的可移植性瘤株，广泛用于肿瘤机理探讨及肿瘤治疗药物筛选研究，荷 H22、S180小鼠已成为常用的肿瘤动物模型之一。肿瘤研究中，H22、S180 两细胞株在昆明小鼠中可以产生实体肿瘤，昆明小鼠来源方便，容易饲养。但能否在昆明小鼠中建立 H22细胞株特异性主动免疫的动物模型，仍需进一步研究。本实验用热休克处理丝裂霉素灭能的 H22、S180 细胞瘤苗分别免疫昆明小鼠，用 H22细胞攻击，观察 H22细胞瘤苗对荷 H22肿瘤细胞昆明小鼠的特异性主动抗瘤作用，在昆明小鼠中建立 H22细胞株特异性主动免疫的动物模型。 免疫核糖核酸(iRNA)可以传递免疫信息，而且具有特异性。目前，临床上应用的抗肿瘤免疫核糖核酸包括抗肝癌、肺癌、乳腺癌等几种。这些免疫核糖核酸是由多个病人肿瘤组织免疫动物获得，关于其临床疗效有不同观点。虽然异种抗原免疫能打破对人的自身抗原的免疫耐受，产生抗肿瘤效应，但是，同种异体肿瘤获得的免疫核糖核酸对病人的个体化治疗存有一定问题。本研究中，用 H22、S180免疫制备的免疫核糖核酸分别治疗 H22荷瘤小鼠，以肿瘤体积、抑瘤率、淋巴细胞增殖活性、NK 细胞杀靶活性、腹腔 Mφ细胞吞噬功能作为检测指标。在实验动物及细胞水平上，试图比较用相同瘤株和不同瘤株免疫制备的免疫核糖核酸对实验动物的抗肿瘤作用，为临床应用提供参考。 1<WP=5>中 文 摘 要 方法 第一部分：将 18±1g 昆明小鼠，随机分为 3 组，每组10 只：NS 组(右侧背部皮下注射无菌生理盐水 0.1ml)，S180瘤苗组(注射 S180瘤苗 5×105/0.1ml)，H22瘤苗组(注射 H22瘤苗 5×105/0.1ml)。间隔 7d 加强免疫 1 次，共 3 次。于末次免疫注射后 7d 对实验组及对照组用 H22 肝癌细胞以 2×106/0.2ml/只接种于 3 组小鼠右前肢皮下。从接种第 4d 卡尺每日测肿瘤体积(V=ab2/2)，描绘 3组荷瘤小鼠肿瘤生长曲线。11 天后，称瘤重，计算抑瘤率。用 MTT 法检测脾脏细胞毒T 细胞(CTL)活性。 第二部分：用 H22、S180细胞株分别免疫 SD 大鼠, 取胸腺、脾、淋巴结、肝脏，提取免疫核糖核酸，未免疫 SD 大鼠淋巴组织 RNA 作对照，白细胞粘附抑制实验(LAI-MTT)检测免疫核糖核酸生物活性。将 18±1g 昆明小鼠分成两批，第一批随机分为注射 NS 组、H22iRNA 组、S180iRNA 组、未免疫动物 RNA 组，每组 10 只，右前肢皮下注射 H22 瘤细胞2×106/0.2ml/只，于注射前第 2、第 1、当天右前肢腋下给药2.0mg/只，此后每隔 1d 给药，共 8 次。观察肿瘤体积、抑瘤率、MTT 法检测淋巴细胞增殖活性、NK 细胞杀靶活性、腹腔 Mφ细胞吞噬功能。第二批 60 只，随机分成三组，每组20 只。A： NS 组，B：第 1 天注射 H22iRNA 组，C：第 5天注射 H22iRNA 组。分别自 H22瘤细胞接种第 1、5 天开始注射 H22iRNA，每隔 1 天给药，共 10 次。接种瘤细胞及给药的剂量同前。观察小鼠生存天数并计算生命延长率。 结果 1. 肿瘤体积的比较 2<WP=6>中 文 摘 要 接种 H22肿瘤细胞 4d 后，每日测肿瘤体积。H22瘤苗组有 2 只小鼠无肿瘤生长，该组肿瘤体积明显小于S180瘤苗组和 NS 组(P<0.01)。S180瘤苗组和 NS 组之间也有统计学差异(P<0.05)。 2. 肿瘤重量比较 接种 H22肿瘤细胞 11d 后，处死小鼠，剥离肿瘤，称量肿瘤重量，计算抑瘤率。H22 瘤苗组的肿瘤大小为 0.580±0.106g，有 2 只小鼠无肿瘤生长。NS 组和 S180瘤苗组均有肿瘤生长，大小分别为 2.715±1.378g、1.843±0.210g。H22瘤苗组的抑瘤效果极为明显，抑瘤率可达 78.64%，与 NS 组比较P<0.01。S180瘤苗组抑瘤率为32.11%，与NS组比较P<0.05。 3. 细胞毒 T 细胞(CTL)活性的比较 用 MTT 法检测脾脏细胞毒T 细胞(CTL)活性。三组细胞毒 T 细胞活性(%)分别为 12.4±2.8、18.7±2.5、39.0±3.3，三组之间均有统计学差异(P<0.05)。 4. 肿瘤体积及抑瘤率、脾脏淋巴细胞增殖实验、NK 细胞杀靶实验、Mφ细胞吞噬功能的比较 H22iRNA 组的抑瘤率为 58.7%，肿瘤体积明显小于另外三组(P<0.01)。该组淋巴细胞增殖活性、NK 杀靶活性、Mφ吞噬功能分别为 3.04±0.35、34.84±2.90、32.08±2.95，较其他三组有显著差异(P<0.01)。S180iRNA 组的各项指标和 NS组及 nRNA 组之间也有统计学差异(P<0.05)。nRNA 组和 NS组之间无统计学差异(P>.05)。 5. 生存时间、生命延长率的比较 第 1d 给药组生存天数及生命延长率为 48.00±1.78d、93.39%，与 NS 组、第 5d 给药组比较具有明显统计学差异 3<WP=7>中 文 摘 要(P<0.01)。第 5d 给药组生存时间为 34.08±2.55d，高于 NS组，也有统计学差异(P<0.05)。 结论 1. 主动免疫肿瘤细胞瘤苗可以明显抑制小鼠肿瘤的生长。 2. 特异性主动免疫的抗瘤作用优于非特异性主动免疫。在昆明小鼠中可以建立 H22细胞株特异性主动免疫的动物模型。 3. 证明了 H22免疫核糖核酸治