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近年来,随着沿海水域富营养化的加剧,世界范围内有毒、有害赤潮呈不断上升的趋势,造成沿海水产养殖的重大经济损失。传统检测方法的测定结果在时间上明显滞后,虽然在某种程度上可以避免人们藻毒素中毒,在保障海产品食用安全方面发挥一定作用,但不能化解和减少因赤潮毒素对养殖业带来的巨大经济损失。只有从毒素源头上入手,及时、准确的预测产毒生物的毒性,才有可能从根本上解除赤潮毒素对人类的威胁,减少因之带来的经济损失。因此,迫切需要建立快速、准确的产毒藻株鉴别技术。
本文以我国主要鱼毒性赤潮藻米氏凯伦藻、海洋卡盾藻、卵圆卡盾藻为目标藻,以非鱼毒性赤潮藻东海原甲藻、锥状斯氏藻为对照藻。利用环境因子铁浓度的调控,分别从鱼毒性赤潮藻的溶血毒素溶血活性特征及其相对应的三维荧光特征两个方面进行研究,利用小波分析、Fisher判别等方法判别鱼毒性赤潮藻与非鱼毒性赤潮藻,进而再判别鱼毒性赤潮藻毒力的强弱,揭示赤潮藻溶血毒素活性强弱与荧光特征谱间的关系。实验成果如下:
1.毒性赤潮藻在不同生长时期藻细胞的溶血活性有所差异,三种卡盾藻衰亡期毒素的溶血活性高于对数生长期和稳定期。米氏凯伦藻对数生长期高于稳定期、衰亡期。在不同的铁浓度条件下,藻类的溶血活性差异显著,低铁条件的溶血活性高于高铁条件下的溶血活性。藻种间溶血活性差异明显,米氏凯伦藻溶血活性较低,而其他三种(株)卡盾藻则相对较高。
2.通过Coif2小波分析发现,在f/2培养基铁条件下,不同生长期的藻类荧光特征谱波形与相对荧光强度无明显变化;在以f/2培养基铁为标准铁浓度的高铁、低铁、不加铁条件下,基本呈现溶血活性强,相对荧光强度较弱,溶血活性弱,相对荧光强度较强。主要集中在第1-10个数据点(波长λEm=650到波长λEm=680nm),35-47个数据点(波长λEm=725nm到波长λEm=750nm;波长λEx=400nm到波长λEx=425nm)的变化。
3.Fisher判别分析表明:鱼毒性赤潮藻与非鱼毒性赤潮藻在属种和门类水平上具良好的判别能力。判别率为82.9%,其中两种非鱼毒性赤潮藻的判别率为100%。鱼毒性赤潮藻在小波分解后进行Fisher判别,所得结果不明显,但提取第1-10数据点与第35-47数据点进行判别,鱼毒性赤潮藻溶血活性强弱分界明显,判别率可达80.6%,有较好的判别效果。结果初步显示,溶血活性与鱼毒性赤潮藻荧光特征谱的第1-10数据点,第35-47数据点具明显相关。