本实验试图建立一种敏感度和特异度都较高的方法，用于临床检测Jo-1抗体，提高我国Jo-1抗体临床血清检测水平，促进我国PM/DM诊治水平的提高。 研究目的：建立稳定可靠、简便、廉价的亲和色谱法，从兔胸腺中纯化出能用于斑点印迹法(DB)检测Jo-1抗体的抗原，初步验证了纯化的Jo-1抗原在DB检测Jo-1抗体的阳性率，以及检测结果对诊断PM/DM的敏感度和特异度，以提高Jo-1抗体的检测水平。 研究材料：兔胸腺保存在-80℃冰箱中，2份单一特异性Jo-1抗体阳性血清，rProteinA预装柱。92份血清标本包括：PM20例，DM11例、系统性红斑狼疮14例、类风湿关节炎13例、原发性干燥综合征8例、成人斯蒂尔病1例、莱特尔综合征1例、抗磷脂综合征1例、正常人23例，均来自于北京协和医院风湿免疫科血清库。 研究方法：冻存的兔胸腺解冻复苏后匀浆，用PBS提取其中总蛋白质，先高速离心1小时，弃沉淀，留上清；上清经超高速离心1小时后，弃沉淀。用-20℃预冷丙酮沉淀上清中的总蛋白质，低温晾干，制成兔胸腺丙酮粉。用适量的PBS提取丙酮粉中的ENA，即得ENA粗抗原。经DID、IB和DB验证，ENA中Jo-1抗原活性好。用预装的rProteinA作为配体，用免疫亲和色谱法纯化单一特异性Jo-1抗血清中的总IgG，经SDS-PAGE验证，纯化的IgG纯度高，DID检测表明其抗体活性较好。把IgG偶联到溴化氰(CNBr)预活化的Sephrose4B上制备免疫亲和色谱柱，用亲和色谱柱纯化ENA粗抗原中的Jo-1抗原。用纯化的Jo-1抗原制备DB试剂盒，初步验证多种风湿免疫病血清和正常血清中Jo-1抗体的阳性率，探讨检测结果对诊断PM/DM的敏感度和特异度。 研究结果：100g兔胸腺可制得5-7g丙酮粉，丙酮粉中的蛋白质含量为19-24％。经亲和免疫色谱纯化的保留组分可富集Jo-1抗原约1900倍，抗原活性回收率为2.5％，DB法显示抗原活性良好，仅和Jo-1抗体阳性血清反应，不和风湿免疫病常见的抗血清反应；在SDS-PAGE上亲和色谱的保留组分并非单一组分，但IB发现只在50KD处有阳性条带。高纯度的Jo-1抗原很不稳定，容易降解失活。MgCl2在水溶液对Jo-1抗原可能有保护作用。用纯化的Jo-1抗原制备DB试剂盒，初步结果提示阳性结果对诊断PM的敏感度为30％，特异度为100％。 研究结论：兔胸腺中有Jo-1抗原，亲和色谱法是一种快速简便的纯化Jo-1抗原的方法，亲和色谱纯化的Jo-1抗原能满足DB法检测Jo-1抗体的要求，亲和色谱法有望成为获取高纯度抗原的有效方法。DB试剂盒检测Jo-1抗体，对诊断PM敏感度和特异度均较目前临床所用检测方法高。