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虾青素(Astaxanthin),化学名称为3,3’-二羟基-4,4’-二酮基-β,β’-胡萝卜素,是一种非维生素A源的酮式类胡萝卜素,具有抗氧化、抗衰老、防辐射、增强免疫力等作用,在食品添加剂、功能性食品、化妆品及医药等领域有广阔的应用前景。法夫酵母是一种高产虾青素的优势酵母菌,传统的法夫酵母虾青素提纯方法存在一定的缺陷,如分离时间长、工作量大等。本论文以高产虾青素的法夫酵母为原料,利用高速逆流色谱快速、高效分离纯化虾青素,并进一步对纯化得到的虾青素的稳定性、安全性进行评估。同时,本文还对法夫酵母中其他类胡萝卜素进行分离纯化,以获得更多的生物活性物质。主要实验结果如下:(1)通过单因素及正交实验,得到法夫酵母虾青素的最佳提取工艺条件:以丙酮作提取剂,DMSO用量1:1.5(w/v),破壁温度45 oC,料液比1:20(w/v),浸提时间40 min,浸提2次。(2)采用两相溶剂体系正己烷-丙酮-乙醇-水(1:1:1:1,v/v/v/v),分离温度25 oC,转速850 rpm,流速3 mL/min,利用高速逆流色谱从100 mg虾青素粗提物中分离纯化得到20.6 mg虾青素(92%纯度);柱层析进一步分离,得到纯度99%的虾青素。(3)光照、温度、pH、金属离子、山梨酸钾等因素对虾青素稳定性有一定的影响。光照越强、温度越高,虾青素稳定性越低,应尽量低温、避光保存虾青素;虾青素在中性略偏碱性的条件下较稳定;对Fe3+、Cu2+比较敏感,包装时应避免使用铁器、铜器。另外,可添加一定量的山梨酸钾提高虾青素产品的稳定性。(4)采用急性经口毒性实验中的限量法,测得虾青素粗提物(78%纯度)对小鼠的经口急性毒性耐受剂量大于15 mg/g,其LD50大于15 mg/g,急性毒性分级为无毒。(5)利用高速逆流色谱和柱层析技术对法夫酵母粗提物进一步分离,推测法夫酵母中除虾青素外还含有β-胡萝卜素、虾青素单酯、角黄素、海胆酮等物质。本论文的实验结果为虾青素的大量制备、开发利用以及其他类胡萝卜素的分离制备提供了理论依据和技术支持。