水稻抗白叶枯病基因Xa23的RFLP分子标记定位

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水稻白叶枯病是由革兰氏阴性菌稻黄单孢菌(Xanthomonas oryzae pv.orzae,Xoo)引起的世界水稻生产中最重要的细菌性病害之一,水稻遭受白叶枯病后,常导致严重的产量损失。发掘利用新的水稻白叶枯病抗性新基因,培育抗病品种是控制该病的最经济有效的手段。章琦等从我国普通野生稻中发掘的Xa23基因,具有抗谱广、抗性强、全生育期抗性等优点,应用前景十分广阔。本研究利用Xa23的近等基因系CBB23以及其感病轮回亲本JG30构建的包含有2562个单株的F2作图群体,采用RFLP技术精细定位Xa23基因。 用与水稻抗白叶枯病基因Xa23紧密连锁的RFLP标记(KJ03A)为探针筛选水稻明恢63的TAC文库,得到34I1、45G1、70M12、90L18、37K24、66M23、77O11等21个阳性克隆,本研究主要对阳性克隆70M12进行分析。利用TAIL-PCR和质粒拯救方法分别分离其L和R末端,命名为70B和70N,然后以该末端为探针进行Xa23的近等基因系CBB23/JG30亲本多态性分析以及F2群体感病植株分析,获得一个与Xa23紧密连锁的RFLP标记70N,该标记距Xa23的遗传图距为0.3cM,为图位克隆Xa23打下基础。 21个TAC阳性克隆质粒用Mbol or Sau3A部分酶切,回收大小为1-4Kb目的片段,连接至载体pZERO-4上,构建成亚克隆文库。然后以广西大学硕士学位论文水稻抗白叶枯病基因Xa23的RFLP分子标记定位亚克隆为探针进行近等基因系CBB23/J G3O亲本多态性分析,有一些亚克隆的杂交信号在亲本上没有多态性,但杂交条带较强,说明水稻TAC明恢63的亚克隆与CBB23和JG3O具有高度的同源性,但其他的某些亚克隆没有杂交带出现。这是由于明恢63和CBB23/JG30的遗传背景不同而引起的。
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