油菜素类固醇(brassinosteroids, BR)作为一种新的植物激素,在植物的生长和发育的整个生命过程中发挥着非常重要的作用。关于BR生物合成途径的研究多集中于一年生的草本植物(如拟南芥,水稻等),在多年生木本植物中少有研究。CPD (constitutive photomorphogenesis and dwarfism)基因与BR的生物合成相关。本实验室最近从胡杨(一种极端耐干旱、耐高温、耐盐碱树种)中克隆到了与拟南芥CPD基因同源的全长cDNA序列(命名为PeCPD),为进一步研究PeCPD基因编码产物在植物组织和细胞内的定位,本研究构建了PeCPD原核表达载体,成功诱导PeCPD在原核细胞内表达,提取纯化了PeCPD的表达产物,制得了相应的抗体,并使用纯化的抗体,通过Western Blot技术对拟南芥PeCPD转基因系中PeCPD的表达产物进行了初步分析。本实验的主要研究结果如下：1构建了pET30a-PeCPD原核表达载体,成功诱导了PeCPD在大肠杆菌Rosetta (DE3)中高效表达。SDS-PAGE检测结果显示,表达的PeCPD蛋白主要以包涵体形式存在。LC-MS/MS质谱鉴定结果表明,表达产物与根据PeCPD基因推测的蛋白一致。2采用亲和层析法和差速离心切胶回收法,纯化了PeCPD目标蛋白。检测结果显示,亲和层析法所得目的蛋白的得率和纯度分别为0.816mg/L和30%,差速离心切胶回收法所得目的蛋白得率和纯度分别37.897mg/L和95%,差速离心切胶回收法效果优于亲和层析法。3以纯化的PeCPD蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,制得了相应的抗血清。ELISA结果显示,其效价为1：320000。琼脂双向扩散法检测显示单一沉淀线,灵敏度为1：3。点印记法检测显示,抗原与抗体反应产生最低可见杂交信号所需的抗体的稀释度为1：3000。以上结果表明所制备的抗体达到后续实验要求。4使用以上抗血清,结合Western blot方法检测了拟南芥cpd突变体(Atcpd)、拟南芥野生型(Atwt)、拟南芥cpd突变体转PeCPD基因系(Atcpd-PeCPD)以及拟南芥野生型转PeCPD基因系(Atwt-PeCPD)内PeCPD基因的表达,发现各品系内除目的蛋白外,还包含其他蛋白质带,表明该抗血清特异性不强,有待进一步改进。