【摘 要】
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目的:民族药刺梨根茎在贵州少数民族地区有着广泛的应用,为验证该民族药的抗炎功效,该文进行刺梨根茎化学成分及其抗炎活性研究,对采自于贵州省贵阳市白云区的新鲜刺梨根茎,结合利用现代提取分离技术,对刺梨根茎中的化学成分进行提取、分离和鉴定,再对分离得到的单体化合物,建立LPS(脂多糖)刺激诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为体外炎症筛选模型,通过检测加入不同浓度各单体化合物后,利用Griess法检测
【基金项目】
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贵州省发改委工程中心项目,黔财建[2019]303号,贵州省天然产物高效利用工程研究中心; 贵州省科技创新能力建设专项,黔科合服企[2020]4013号,贵州食药用资源康养产品研发与成果转化创新能力提升平台建设项目; 贵州省工信厅刺梨专项,黔财农[2019]261号,刺梨活性成分提取,标准化制备及生物功效研究; 贵州省工信厅刺梨专项,黔财农[2020]307号,刺梨核心功效及健康养生产品研究与开发
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目的:民族药刺梨根茎在贵州少数民族地区有着广泛的应用,为验证该民族药的抗炎功效,该文进行刺梨根茎化学成分及其抗炎活性研究,对采自于贵州省贵阳市白云区的新鲜刺梨根茎,结合利用现代提取分离技术,对刺梨根茎中的化学成分进行提取、分离和鉴定,再对分离得到的单体化合物,建立LPS(脂多糖)刺激诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为体外炎症筛选模型,通过检测加入不同浓度各单体化合物后,利用Griess法检测小鼠巨噬细胞NO的释放量,与地塞米松组别对比,探索刺梨根茎中具有较好抗炎作用的化合物质,为后期研究其分子机制和体内外吸收代谢规律,以及体内抗炎机制打下基础。方法:将新鲜刺梨根茎切碎,用80%乙醇浸泡2天,再用80%乙醇进行回流提取3次,每次2小时,将回流提取液浓缩为浸膏备用。运用正相硅胶、MCI柱层析、半制备HPLC、葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱层析等多种分离材料和分离技术对刺梨根茎进行分离和纯化,结合化合物的理化性质及1D-NMR核磁共振波谱、质谱等波谱数据,对化合物进行结构鉴定;建立LPS(脂多糖)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7体外炎症筛选模型,并将分离得到的化合物配置为不同摩尔浓度,用MTT法检测在570nm下吸光度值,用于评价不同化合物不同摩尔浓度对小鼠巨噬细胞增殖的影响,利用Griess法按试剂盒操作测定不同浓度下吸光度值,并利用标准品的标准曲线,计算不同化合物不同浓度下炎症因子NO的释放量。并计算阳性药地塞米松的半数抑制浓度(IC50=22.46μmol/L),通过计算化合物的半数抑制浓度(IC50)与阳性药半数抑制浓度相比,评价不同化合物的体外抗炎效果。结果:依据上述分离鉴定方法,从刺梨根茎中分离鉴定化合物23个,依次为(1)刺梨苷(Kajiichigoside F1),(2)野蔷薇苷(Rosamultin),(3)蔷薇酸(Euscaphic acid),(4)β-D-glucopyranosyl-(2a→1b)-2a-O-β-l-arabinopyranosyl-(2b→1c)-2b-O-β-l-arabinopyranosyl-(2c→1d)-2c-O-β-l-arabinopy-ranosyl-(2d→1e)-2d-O-β-l-arabinopy-ranosyl-(2e→1f)-2e-O-β-l-arabinopyranoside,(5)儿茶素(Catechin),(6)3-O-methylellagic acid 4’-O-β-D-xylopyranoside,(7)3-O-methylellagic acid-4,-O-α-L-rham-nopyranoside,(8)委陵菜酸(Tormentic acid),(9)桦木酸(Betulinic acid),(10)spinosic acid,(11)阿江榄仁酸(arjunic acid),(12)β-谷甾醇(β-Sitosterol),(13)β-胡萝卜苷(Daucosterol),(14)α-生育酚(α-tocopherol),(15)正二十六烷(Hexacosane),(16)齐墩果酸,(17)熊果酸,(18)5-甲氧基-4,6-二羟基-苯甲酸乙酯,(19)没食子酸,(20)4,4,6a,11,11,14b-heptamethyl-1,2,3,4,-4a,5,6,6a,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-ol,(21),2,6,10,14-tetramethyl-18-butanecarboxymethylene-henecos-12-en-17β-ol,(22),corosolic acid,(23)ethyl-β-D-glucopyranoside。各化合物对LPS诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎症模型表明,化合物1、2、3、4、5、6、7对炎症因子NO的释放均有较好抑制作用,且呈剂量依赖关系,其半数抑制浓度依次为25.07μmol/L、24.56μmol/L、17.65μmol/L、9.87μmol/L、16.67μmol/L、40.83μmol/L、34.98μmol/L,阳性药地塞米松半数抑制浓度为22.46μmol/L,与阳性药相比,化合物3、4、5表现出较好的抗炎活性。结论:从刺梨根茎中分离得到23个化合物,包括11个三萜及其苷类化合物,2个鞣花酸糖苷类化合物,2个甾醇及其苷类化合物,1个黄酮类化合物,2个寡糖,2个没食子酸类化合物,1个多酚化合物和2个脂肪烃化合物。化合物4、6、7、20、21、23为首次从该植物中分离得到。体外小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型表明,化合物3、4、5半数抑制小于阳性药地塞米松,表现出较好抗炎活性。
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