腺病毒作为疫苗载体被广泛应用于各种基础研究和临床实验。现在常见的商业化腺病毒载体为人5型腺病毒载体(AdHu5)，但由于人群中广泛存在针对AdHu5的中和抗体，所以AdHu5的临床应用受到限制。本研究中，我们研究了一种黑猩猩来源的腺病毒AdC68作为疫苗载体的可行性，该载体的E1区域被删除，该删除区可以插入外源基因的表达框。同时，E1基因的删除使AdC68只能在整合了E1基因的HEK293细胞系复制，在其它细胞系只能感染一轮并不能完成复制，这保证了该载体的生物安全性。　　在第一部分研究中，我们详细介绍了如何构建重组AdC68疫苗载体。以构建表达狂犬病毒glycoprotein的AdC68-rab.GP为例，目的基因序列首先被克隆至穿梭载体pShuttle，然后用PI-Scel和/-Ceul将pShuttle的外源表达框酶切下来，用低熔点琼脂糖胶内直接酶连的方法将外源表达框克隆至AdC68质粒载体。质粒构建完成后，将腺病毒包装扩增纯化，然后免疫小鼠。动物实验结果显示，无论是口服免疫、滴鼻免疫或者肌肉注射免疫该重组腺病毒，只需免疫一次，就可以在小鼠体内诱导出较高水平的狂犬病毒特异性中和抗体。这证明了我们构建AdC68疫苗载体方法的正确性，也充分显示了AdC68作为疫苗载体有良好的应用前景。　　在第二部分研究中，我们首先调查了苏州地区从2012年到2013年的手足口病流行情况，发现苏州地区的手足口病主要由CA6(Coxsackievirus A6)、CA10、CA16以及EV71(Enterovirus71)所引起。但我们也发现，在2013年的手足口病样本中，CA10和CA6所占的比例较2012年大幅度上升，这说明苏州地区的手足口病病原体类型在2013年发生了较大变化，公共卫生机构对手足口病的监视应该囊括更多的病原体。在此流行病学调查中，我们发现了不同肠道病毒的共感染，所以基于该调查，我们研发了基于腺病毒AdC68载体的双价疫苗，以预防多种手足口病病原体。在该疫苗研究中，我们把CA16的线性中和表位PEP71插入AdC68外壳蛋白Hexon的HVR1（Hypervariable region1）区域，同时将截短的EV71的线性中和表位sSP70(shortened SP70)插入Hexon的HVR2区域，这样改装后的AdC68病毒颗粒外壳蛋白上就可以展示两种外源表位。为了增加针对EV71的免疫效果，我们在Hexon改装后的腺病毒载体E1区域，插入EV71的VP1蛋白。动物免疫结果显示，该载体可以在小鼠体内诱导同时针对EV71和CA16两种病毒的中和抗体。血清被动转移保护实验显示，注射了抗血清的新生鼠可以有效拮抗CA16或EV71致死剂量的攻击感染。同时，我们发现Hexon改造后的腺病毒免疫原性发生改变，即抗Hexon改造腺病毒的抗血清不能很好地中和野生型Hexon腺病毒，这更加拓展了Hexon改装的腺病毒在疫苗研究的中应用范畴，因为这种策略就可以避免宿主中预存中和抗体的影响。　　综上所述，黑猩猩腺病毒载体AdC68是一个理想的新型疫苗研发平台，可以广泛应用于基础研究和临床实验，为新型疫苗研发和疾病防控提供技术保障。