葛根有效成分提取及分离纯化工艺研究

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葛根(Radix Puerariae)系豆科植物野葛Pueraia lobata (Willd.) Ohwi的干燥根,素有“千年人参”的美誉,是国家卫生部批准的药食两用植物。具有提高免疫、解热、护肝、抗氧化、降血糖、改善心脑血管疾病等功效,是传统医学上的常用药物。大量研究表明,葛根黄酮是葛根中的主要活性成分,其中以葛根素的含量最高。葛根素与葛根总黄酮的含量通常被作为评价葛根质量的标准。本文以葛根为原料,主要从以下几个方面进行了研究。分别采用乙醇回流提取法、木瓜蛋白酶酶解辅助提取法研究了葛根有效成分的提取工艺;另外,对葛根有效成分进行了分离纯化工艺研究,探索出了一条较为成熟的分离工艺路线。最后,对葛根提取物进行了抗氧化能力的比较。1.乙醇回流法提取葛根中的有效成分:以葛根中主要活性成分葛根素和葛根总黄酮得率为指标,利用紫外分光光度计(UV)和高效液相色谱(HPLC)分别测定了葛根素和葛根总黄酮的含量,全面评价了不同提取条件对葛根素和葛根总黄酮得率的影响。乙醇回流法提取葛根有效成分的提取工艺为:用20倍量50%的乙醇溶液作提取溶剂,每次提取120 min,提取2次。葛根素得率为1.998%,葛根总黄酮得率为8.914%。2.木瓜蛋白酶酶解辅助提取葛根中的有效成分:首先考察了酶解时间、酶解浓度及酶解温度等单因素对葛根素和葛根总黄酮得率的影响,进一步利用正交试验,以葛根素和葛根总黄酮得率为综合评价指标得出了最佳提取工艺条件,结果表明:当酶解时间为4 h,酶解浓度为2%,酶解温度为60℃,酶解pH为6时,葛根素得率为2.201%,葛根总黄酮得率为10.613%,木瓜蛋白酶酶解辅助提取葛根有效成分的得率比乙醇回流法高。3.通过大孔树脂静态吸附解析实验,对HPD-750、FL-2、AB-8、X-5、NKA-Ⅱ五种大孔树脂进行了比较,筛选出AB-8大孔树脂作为分离葛根有效成分的柱材料。通过单因素实验对上样pH、饱和吸附量、上样液浓度、径高比、洗脱剂浓度和用量进行了考察,得到了最佳纯化工艺条件。实验结果为:葛根醇提液浓缩后直接上样,上样液浓度7.59 mg/mL,径高比1:6,上样吸附后,先用3 BV水洗除杂,再用40%的乙醇洗脱3 BV。分离得到的提取物中葛根素含量为29.59%,葛根总黄酮含量为64.39%。4.利用DPPH·法和2-脱氧核糖氧化降解法研究了葛根素纯品和不同醇浓度葛根提取物的抗氧化活性。实验结果表明:葛根素纯品对DPPH-的清除能力很弱,且不能有效地抑制Fenton反应诱导的2-脱氧核糖氧化降解;而不同醇浓度葛根提取物对DPPH表现出较好的清除作用,而且可以有效抑伟Fenton反应诱导的2-脱氧核糖氧化降解。由此说明葛根中含有比葛根素抗氧化能力更强的化学成分,这些物质可能是其他多羟基的黄酮类化合物。
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