目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是以异常神经元凋亡为主要发病机制的疾病,国内外研究表明艾灸可以有效的防治和延缓PD的进程,其机制或许是艾灸可以保护神经元免于凋亡。PI3K/Akt信号通路是一条重要的促进细胞存活通路,那么艾灸防治PD的机制是否与PI3K/Akt信号通路相关?本次实验以杀虫剂鱼藤酮作为模型诱导剂,实验对象是鱼藤酮诱导的PD模型大鼠;指导思想是中医理论,以艾灸为干预方法,选择“关元(CV4),足三里(ST36)和风府(GV16)”三个穴位;以抗神经元凋亡为切入点;观察艾灸治疗对PD模型大鼠黑质部TH的含量、TH神经元数目以及PI3K/Akt信号通路表达的影响,以探讨艾灸治疗PD的可能作用机制,以期为临床更加广泛的运用艾灸防治PD提供更多的实验依据。方法:50只6周龄SPF级健康雄性SD大鼠,体重180-220g,经3次行为学测试无自发行为学异常。将上述大鼠纳入实验研究,首先各组大鼠适应性喂养14d后,按随机数字表法抽取20只大鼠分为两组每组各10只,即正常组和假手术组,余下大鼠(30只)通过颈部皮下注射鱼藤酮溶液(鱼藤酮溶解在二甲亚砜与生理盐水混合液中,其中二甲亚砜与生理盐水体积比为7:1,鱼藤酮浓度为1mg/ml,大鼠注射剂量为1ml/kg)的方法构建PD模型;假手术组在同一部位注射二甲亚枫和生理盐水混合液(体积比7:1,注射量为1ml/kg);正常组未予任何处理,只每天抓取固定一次;以上操作1次/d,连续共40d。造模结束后第二天上午9时参照陈忻等制定的行为学评分标准对各组大鼠的外观及行为学表现进行评分,评分在2-8分的大鼠视为造模成功,排除造模不成功的大鼠。将成功造模的20只大鼠随机分为模型组和治疗组,其中治疗组的大鼠使用简单的衣物固定,参照《实验针灸学》的取穴方法,选取“关元(CV4),足三里(ST36)和风府(GV16)”三个穴位,使用长10cm、直径0.7cm的艾条点燃悬于穴位上方约2cm左右处(具体高度以手触摸艾灸局部皮肤的温度和艾灸时大鼠的表现为依据进行小幅度的调整),每穴艾灸15min(其中两侧足三里(ST36)交替使用),1次/d,连续治疗14d;在治疗期间其余3组大鼠不予任何治疗,只每天在相同的时间抓取固定,整个造模和治疗期间各组大鼠同步喂养;造模结束后对各组大鼠进行行为学评分并进行统计学分析比较;行为学评分完成后对各组大鼠进行实验取材(中脑黑质部):其中每组半数大鼠腹腔注射麻醉后行左心室多聚甲醛灌注内固定,取脑组织做切片,检测大鼠黑质中TH的含量及TH神经元的阳性表达情况并统计学分析比较;余下各组大鼠腹腔注射麻醉后取新鲜部分脑组织(中脑黑质部),检测各组大鼠脑黑质中PI3K mRNA、Akt mRNA的相对表达量及蛋白的表达进行统计学分析并比较。结果:(1)与正常组和假手术组相比,模型组大鼠外观及行为学评分显著升高(P<0.01);艾灸治疗14d后,与模型组相比,治疗组大鼠外观及行为学表现得到显著改善,评分明显下降(P<0.01)。(2)与正常组和假手术组相比,模型组大鼠黑质部的TH免疫反应减弱,平均光密度值明显降低(P<0.05);艾灸治疗14d后,与模型组比较,治疗组大鼠TH免疫反应及平均光密度显著增加(P<0.05)。(3)与正常组和假手术组相比,模型组大鼠黑质TH神经元数目显著下降(P<0.01);艾灸治疗14d后,与模型组比较,治疗组大鼠黑质TH神经元数目明显增加(P<0.01)。(4)与正常组和假手术组相比,模型组大鼠黑质PI3K、Akt蛋白表达下降(P<0.05);艾灸治疗14d后,与模型组比较,治疗组大鼠黑质PI3K、Akt蛋白表达显著增加(P<0.05)。(5)与正常组和假手术组相比,模型组大鼠黑质PI3K mRNA、Akt mRNA相对表达量下降(P<0.05);艾灸治疗14d后,与模型组比较,治疗组大鼠黑质PI3K mRNA、Akt mRNA相对表达量明显增加(P<0.05)。结论:(1)颈背部皮下注射鱼藤酮可以成功复制出PD模型。(2)PD模型大鼠的外观及行为学异常经艾灸治疗可以明显改善。(3)模型组大鼠黑质TH的含量降低,经艾灸治疗后其含量显著增加,并且增加TH神经元的数量。(4)艾灸治疗可显著上调PD模型大鼠黑质PI3KmRNA、AktmRNA的相对表达量及其蛋白的表达水平,说明艾灸可能可以激活PI3K/Akt信号通路,从而发挥抑制神经元凋亡改善PD模型大鼠症状的作用。