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目的:胃癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一,其发病率较高,晚期预后差,严重危害了人类的生命健康。近年来,关于线粒体DNA突变及其单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与肿瘤生成的研究备受关注。线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)是细胞核外唯一的遗传物质,编码参与氧化磷酸化和ATP生成所需要的多肽,由于本身缺乏组蛋白的保护、缺少有效的基因修复系统等原因,相比于核基因组,mtDNA更易于受到氧化损伤而致突变。mt DNA由编码区和非编码区两部分组成,其编码区包含13种多肽编码基因、2种rRNA基因和22种t RNA基因,而D-Loop区是mtDNA的唯一非编码区。COX基因作为mt DNA编码区的基因之一,其编码产物(COXⅠ-Ⅲ亚基)是细胞色素氧化酶(cytochrome oxidase,COX)的重要组成部分。细胞色素氧化酶是线粒体呼吸链传递中的关键酶,其编码基因的突变和多态性可能与肿瘤发生相关。本研究通过对胃癌患者及正常人群的COX基因进行PCR扩增、测序,发现与胃癌发病相关的SNPs位点,然后将这些位点SNPs与患者临床特征进行对比分析,以探究COX基因SNPs与胃癌发生发展的关系,为胃癌的早期诊断和治疗提供新思路。方法:1研究对象及标本采集:病例组为100例胃癌患者,均为2007年5月-2008年8月于河北医科大学附属第四医院外三科行根治术的病人,所有患者手术前均行胃镜检查、咬取组织送病理化验诊断为胃癌。对照组为2013年9月-2014年6月期间在河北医科大学附属第四医院体检的100例健康人。分别留取胃癌患者及正常人的外周静脉血标本3ml,观察并记录胃癌患者的年龄、性别、肿瘤大小等临床特征,同时全面记录对照组人群的体检资料。2线粒体DNA提取:使用DNA提取试剂盒分别提取胃癌患者及正常对照组人群外周静脉血的线粒体DNA,经DNA定量检测合格后,置于零下20℃冰箱中长期保存备用。3线粒体dnacox基因的扩增及测序:通过查阅文献得知cox基因包括coxⅠ、coxⅡ和coxⅢ三段基因,我们把整个cox基因按约600bps大小分成9个小基因片段(见table2),然后给每段基因片段设计上下游引物,之后再采用pcr技术对每段基因片段进行dna扩增。pcr扩增产物首先经琼脂糖凝胶电泳纯化,然后采用凝胶成像系统检验dna条带扩增情况,若dna条带扩增良好,将该样品送至生物科技有限公司(北京)进行测序。4统计分析:对于计数资料,采用χ2检验进行比较;对于计量资料,当n<30例时采用t检验,n≥30例采用u检验。采用spss21.0统计软件处理实验数据,p<0.05被认为有统计学意义。结果:1胃癌组的年龄、性别与正常对照组相比没有显著性差异(p>0.05),说明两组资料均衡可比。2在胃癌组及对照组中随机选出28例标本dna进行整段cox基因的扩增和测序,结果共发现6392t/c、6455c/t、6962g/a、7196c/a、7853g/a、9540t/c、9548g/a、9824t/c、9950t/c9个高频率多态性位点(出现频率>5%)。将以上9个多态性位点的分布频率进行统计学处理后,可以看出胃癌组9540t/c位点的snps分布频率相比于对照组有临界性差异(χ2=3.541,p=0.06),同时9548g/a位点在病例组与对照组间的分布频率(χ2=1.409,p=0.235)也可能具有统计学意义,这两个位点的snps分布频率可能与胃癌发病风险相关。3将9540t/c及9548g/a所属基因片段的病例数增加至100例,发现9540t/c位点的snps与对照组相比具有统计学意义(χ2=4.504,p=0.034),另外发现9548g/a位点snps在病例组和正常对照组间的分布频率同样具有统计学差异(χ2=4.188,p=0.041)。4分别将9540t/c、9548g/a两个位点snps分布频率和胃癌患者的临床特征进行比较分析,结果显示,这两个位点snps与胃癌患者临床特征,包括年龄、性别、肿瘤长径、肿瘤分化程度、肿瘤分期、脉管瘤栓及神经受侵等均无关(p>0.05)。1 mt DNA编码区COX基因上的9540T/C、9548G/A两个位点SNPs与胃癌发病风险相关,9540C基因型可能降低了胃癌的发病风险,而9548A基因型可能增加了胃癌的发病风险。2 COX基因的9540T/C、9548G/A两位点的SNPs与胃癌患者临床特征没有相关性。结论: