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乙型肝炎(Hepatitis B,HB,以下简称乙肝)是世界上分布最广泛的传染病之一,是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV,以下简称乙肝病毒)引起的.中国是乙型肝炎的高发区,该病毒携带者的人数已达到甚至超过10﹪.此病呈慢性病程,可引发急、慢性肝炎,严重的导致肝硬化甚至肝癌.该研究旨在构建HBaAg的高表达载体用以转化草莓,最终实现利用转基因草莓生产口服乙肝疫苗,这对于中国防治乙型肝炎有重要的意义.我们对以下三方面的内容进行了研究:1、根据Genebank上发表的乙肝病毒表面抗原基因(HBsAg)序列设计一对引物,用PCR法从乙肝病毒DNA中扩增出810bp的DNA片段.随后将该基因克隆到T-载体上,热激法转化大肠杆菌,对重组质粒中的插入片段进行DNA测序,证明与HBsAg的碱基序列基本相同.2、利用实验室保存的SK(-)和pBADH质粒,构建了HBsAg基因的植物表达载体pBH.pBADH是一个双元表达载体,由pBin438载体和外源基因BADH(甜菜碱合成酶基因)组成,pBin438载体上含CaMV双重35s启动子和翻译增强子TMV的"Ω"片段和一个嵌合的NOS-NPTⅡ基因,NPTⅡ基因产物能够磷酸化卡那霉素及其衍生物,因此这个基因可用于转化植物的筛选.把BADH基因从pBADH中去除,将HBsAg基因连入,使其在双35s启动子控制下,构建出植物表达载体pBH.3、检验了所构建的植物表达载体.首先优化了百脉根的叶盘法转化体系,之后利用农杆菌介导法将pBH转入百脉根,获得了36株卡那霉素抗性筛选苗,经PCR检测有9株为阳性,从而初步验证了该载体能将HBsAg基因导入植物中.为下一步转化草莓提供了表达载体,为研究利用转基因草莓生产乙肝疫苗奠定良好的基础.