两种多糖为载体的磁性纳米粒的比较研究

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本课题将当归多糖作为载体材料制备当归多糖磁性纳米粒,并将其与目前市场上常用的两种多糖包覆的磁性纳米粒进行体内外性状的比较研究,考察当归多糖作为磁性纳米载体材料的可行性。本实验主要从五个方面进行比较研究:制备方法、质量控制、体外表征、体内分布和载药性能。第一部分三种多糖包覆的磁性纳米粒的制备以岷县当归为原料,采用水提醇沉,氢氧化钙去鞣质的方法从当归根茎中提取当归多糖浸膏;采用苯酚-硫酸法测定当归多糖浸膏糖含量;采用化学共沉淀法制备三种磁性纳米粒;通过比较产品表观性状、水溶性、磁响应性和粒径分布,初步评估制备方法的可行性,选择体外稳定性较好的磁性纳米粒作为参比试剂,进行后续的比较研究;比较磁倾析法和动态透析法两种不同的纯化方式,最终选用动态透析法纯化得到两种精制磁性纳米粒,分别命名为当归多糖磁性纳米粒(Asp-Fe3O4)和葡聚糖磁性纳米粒(Dex-Fe3O4);分别采用苯酚-硫酸法和邻二氮菲法测定磁性纳米粒的糖含量和铁含量,以初步评估两种磁性纳米粒外层多糖的包覆量。实验结果表明:当归多糖浸膏的糖含量为67.72%;当归多糖磁性纳米粒和葡聚糖磁性纳米粒具有良好的体外性状,表现为水溶性良好,粒径分布均匀,磁响应性强,壳聚糖磁性纳米粒体外稳定性较差,表现为水溶性差,体外易团聚;当归多糖磁性纳米粒的糖含量为16.13%,Fe3O4含量为68.90%,葡聚糖磁性纳米粒的糖含量为39.80%,Fe3O4含量为49.50%。综上所述,初步确定当归多糖可作为磁性纳米粒的载体材料,成功制备当归多糖磁性纳米粒;葡聚糖磁性纳米粒体外性质稳定可作为参比制剂,进行后续的比较研究;壳聚糖磁性纳米粒不适于作为本实验的参比制剂,进行后续的比较研究。第二部分两种多糖包覆的磁性纳米粒的体外表征比较采用第一部分确定的制备工艺合成当归多糖磁性纳米粒和葡聚糖磁性纳米粒,并对两种磁性纳米粒的理化性质进行考察,评价当归多糖磁性纳米粒的体外表征。通过傅里叶红外光谱仪确定多糖和磁核Fe3O4的连接状况,通过X射线衍射仪分析磁性纳米粒的纯度和晶型结构,通过透射电镜和激光粒度分析仪观察磁性纳米粒的形态和粒径分布,通过振动样品磁场计考察磁性纳米粒的磁学性能。傅里叶红外光谱图显示两种多糖成功包覆于磁核Fe3O4表面,并与磁核表面的官能团形成稳定的化学键;X射线衍射图谱显示磁性纳米粒的主要成分为Fe3O4晶体,晶体纯度高;透射电镜和激光粒度分析图谱显示两种磁性纳米粒均为椭球形,分散性良好,二者的平均水合粒径分别为82.3nm和75.4nm;磁化曲线图谱显示两种磁性纳米粒均具有超顺磁性,二者的饱和磁化强度分别为21emu/g和22emu/g。通过比较两种磁性纳米粒的体外表征发现:与Dex-Fe3O4相比较,当归多糖磁性纳米粒体外表征性状良好,适于进行后续的体内分布的比较研究。第三部分两种多糖包覆的磁性纳米粒的体内靶向分布研究通过比较两种磁性纳米粒在大鼠体内的分布代谢情况,对二者的体内稳定性和分布行为进行评价。以SD雄性大鼠为模型动物,采用尾静脉给药方式,考察在未置磁铁和外置磁铁两种情况下磁性纳米粒在大鼠体内的铁处置状况。采用原子吸收光谱法,以脏器铁为检测指标,分析两种磁性纳米粒在大鼠心、肝、脾、肺和肾的含量变化;采用普鲁士蓝染色法,以铁离子为检测目标,考察两种磁性纳米粒在大鼠肝脏和肾脏的铁离子分布状况。实验结果表明:未置磁铁时,两种磁性纳米粒在体内均具有良好的被动靶向性,葡聚糖磁性纳米粒被动靶向于肝、脾和肺,当归多糖磁性纳米粒被动靶向于脾和肺;外置磁铁时,两种磁性纳米粒均能够表现出良好的肝脏靶向性,即主动靶向性。通过比较两种磁性纳米粒的体内靶向分布进一步确证,当归多糖磁性纳米粒体内性状稳定,适于进行载药性能的比较研究。第四部分两种磁性纳米粒的载药性能考察采用反相微乳法,以5-FU为模型药物,戊二醛为交联剂,制备两种载药磁性纳米粒,分别命名为载药当归多糖磁性纳米粒(5-FU-Asp-Fe3O4)和载药葡聚糖磁性纳米粒(5-FU-Dex-Fe3O4)。体外考察两种载药磁性纳米粒的粒径、载药率、包封率、磁响应性和释药特征,比较两种磁性纳米粒的载药性能。通过激光粒度分析仪评价载药磁性纳米粒的粒径分布,通过紫外分光光度法检测载药磁性纳米粒的载药率和包封率,通过溶出度实验考察载药磁性纳米粒在PBS缓冲溶液的释药特征,通过沉降法比较两种载药磁性纳米粒的磁响应性。实验结果表明:5-FU-Asp-Fe3O4和5-FU-Dex-Fe3O4载药后粒径增大,约260nm,分散度明显减小;5-FU-Asp-Fe3O4的载药率为8.98%,包封率为39.30%;5-FU-Dex-Fe3O4的载药率为14.31%,包封率为62.77%;载药当归多糖磁性纳米粒的药物释放形式为缓释过程,载药葡聚糖磁性纳米粒的药物释放形式为控释过程。载药后两种磁性纳米粒的体外磁响应性良好。综上所述:当归多糖能够作为一种新型的载体材料,制备当归多糖磁性纳米粒,该制剂有望应用于靶向药物传递系统。
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