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目的:1.验证软骨细胞焦亡是导致骨关节炎的因素之一;2.验证ROS增高可以激活软骨细胞焦亡途径;3.探讨ROS诱导软骨细胞焦亡促发软骨细胞炎症的潜在机制。方法:本实验采用C28软骨细胞的细胞系,用培养基（即1%的包含青霉素和链霉素混合形成的液体:5-10%的胎牛血清:90%-95%不含胎牛血清的DMEM）进行传代培养。细胞系按实验处理条件不同分为3组,正常细胞组:（A组,加入与诱导剂同体积的saline）;1μg/ml LPS+ATP诱导组（B组,1μg/ml LPS和5mg/ml）;10μg/ml LPS+ATP诱导组（C组,10μg/ml LPS和5mg/ml ATP）。在温度为37摄氏度,CO2体积占比为5%的培养箱中进行孵育,直到细胞铺至培养皿或6孔板的75%-85%左右时,分别进行不同浓度的LPS诱导12小时,再加入5mg/ml ATP诱导3小时。药物干预处理后,各组细胞分别进行ROS检测,LDH检测,Western Blot测NLRP3、caspase-1、caspase-4和GSDMD的含量,和ELISE法测IL-1β和IL-18。结果:1.CCK-8细胞增殖-毒性检测:细胞存活率的大小。（1）各组诱导相同:首先LPS诱导时间为6小时时,结果提示,随着诱导剂LPS浓度的增加,B（89.63%±0.67%）组和C（81.22%±2.79%）组细胞的存活率明显降低,并低于A（100%±0%,P<0.05）组细胞的存活率。并且,C组细胞的存活率明显比B组（P<0.05）的低。当LPS诱导时间为12小时时,结果提示,随着诱导剂LPS浓度的增加,B（81.39%±1.98%）组和C（77.57%±1.87%）组细胞的存活率明显降低,并低于A（100%±0%,P<0.05）组细胞的存活率。并且,C组细胞的存活率与B组无显著差异（P>0.05）。当LPS诱导时间为24小时时,结果提示,随着诱导剂LPS浓度的增加,B（68.88%±3.57%）组和C（63.20%±1.97%）组细胞存活率明显降低,并低于A（100%±0%,P<0.05）组细胞的存活率。并且,C组的细胞存活率与B组无显著差异（P>0.05）。（2）各组诱导相同:首先诱导浓度为B时,随着诱导时间的延长,24h的细胞存活率明显降低,并低于6h和12h（P<0.05）细胞的存活率。并且,6h细胞的存活率同12h的没有显著的差异（P>0.05）。诱导浓度为B时,随着诱导时间的延长,24h的细胞存活率明显降低,并低于6h和12h（P<0.05）细胞的存活率。并且,6h细胞的存活率同12h的没有显著的差异（P>0.05）。2.ROS检测:结果显示,与A组相比较,B和C组的C28细胞在LPS诱导后,细胞内绿色荧光强度显著增高,同时,C组C28细胞内荧光强度明显高于B组,说明LPS可以使细胞产生更多的活性氧。3.LDH活性检测:随着诱导剂LPS浓度的增加,B（181.50%±7.78%）组和C（240.00%±21.21%）组细胞培养液中的LDH含量明显增高,并高于A（100%±0%,P<0.05）组的含量。并且,C组细胞培养液中的LDH含量明显高于B组（P<0.05）的。4.ELISE法测IL-1β和IL-18:细胞培养液中IL-1β因子的含量结果提示:随着诱导剂LPS浓度的增加,B（1.6863±0.0416）组和C（2.0230±0.0783）组的细胞培养液中的IL-1β含量明显增高,并高于A（1±0,P<0.05）组的含量。并且,C组的含量明显高于B组的含量（P<0.05）。细胞培养液中IL-18因子的含量结果提示:随着诱导剂LPS浓度的增加,B（1.6913±0.1052）组和C（2.0533±0.1391）组细胞培养液中的IL-18含量明显增高,并高于A（1±0,P<0.05）组的含量。并且,C组的含量明显高于B组的含量（P<0.05）。5.Western Blot测NLRP3、GSDMD、caspase-4和caspase-1的含量:（1）相对于A（100%±0%）组的NLRP3来说,B（152.00%±3.11%）组和C（184.35%±6.72%）组的蛋白条带灰度值较A组（P<0.05）显著增高。并且,C组的蛋白灰度值显著高于B组（P<0.05）。结果提示,随着诱导剂LPS浓度的增高,NLRP3蛋白表达显著增加。（2）相对于A（100%±0%）组的GSDMD来说,B（137.20%±2.97%）组和C（162.70%±3.04%）组的蛋白条带灰度值较A组（P<0.05）的显著增高。并且,C组的蛋白灰度值显著高于B组（P<0.05）。结果提示,随着诱导剂LPS浓度的增高,GSDMD蛋白表达显著增加。（3）相对于A（100%±0%）组的caspase-4来说,B（130.60%±1.13%）组和C（161.10%±3.54%）组的蛋白条带的灰度值较A组（P<0.05）的显著增高。并且,C组的蛋白灰度值显著高于B组（P<0.05）。结果提示,随着诱导剂LPS浓度的增高,caspase-4蛋白表达显著增加。（4）相对于A（100%±0%）组的caspase-1来说,B（136.90%±1.98%）组和C（152.35%±3.61%）组的蛋白条带灰度值较A组（P<0.05）的显著增高。并且,C组的蛋白灰度值显著高于B组（P<0.05）。结果提示,随着诱导剂LPS浓度的增高caspase-1蛋白表达显著增加。结论:1.软骨细胞焦亡是导致骨关节炎的致病因素之一;2.LPS诱导软骨细胞内ROS增高可以激活软骨细胞焦亡的途径;3.LPS诱导软骨细胞内ROS的升高可通过激活炎症小体NLRP3促发软骨细胞焦亡,进而导致软骨细胞分泌炎症因子。