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Orexin是在下丘脑外侧区(LHA)发现的一种具有调节摄食和能量平衡作用的神经肽。采食量是影响动物生产性能的主要因素之一,从机体生理调控角度对采食量进行研究具有重要的意义。本试验采用基因质粒注射的方法,在小鼠后腿肌肉注射重组质粒pcDNA3.1(+)-Orexin A,通过实时荧光定量PCR的方法检测注射部位肌肉中OrexinA mRNA的表达,分析其表达规律从而筛选出适宜的注射剂量和作用时间。在此基础上,选用180只3周龄断奶的雄性昆明小鼠,按照体重随机分为6个处理(注射生理盐水对照组,注射空质粒对照组,每只注射重组质粒5μg、101μg、15μg、25μg4个处理组),每个处理3个重复,每个重复10只放在一个笼中饲养,各处理间初始平均体重差异不显著。试验为期20天,于每天8:00和18:00分别对饲料进行称重,18:00时对小鼠进行称重,监测肌肉注射重组质粒pcDNA3.1(+)-Orexin A对小鼠采食量和体重的影响。
研究结果如下:
1.重组质粒pcDNA3.1(+)-OrexinA在注射部位肌肉中的表达
(1) 按照不同剂量肌肉注射重组质粒均能在注射部位检测到Orexin A mRNA的表达,表达时间可以一直持续到第40天。
(2) 当注射剂量为10μg只时,注射部位肌肉中Orexin A mRNA的表达量最高,其在第10天时的表达量显著高于其他注射剂量处理组(P<0.05)。当注射剂量升高时,其表达水平没有相应的增加。
(3)肌肉注射重组质粒后第5天可以在注射部位肌肉中检测到Orexin AmRNA的表达,第10天时表达量最高,随后下降;不同注射剂量均表现出相同的变化趋势。
2.肌肉注射重组质粒对血清中OrexinA蛋白含量的影响
用放射免疫的方法对各处理组血清中Orexin A蛋白含量进行检测的结果显示,肌肉注射10μg~100μg的重组质粒对血清中Orexin A含量没有显著的影响。血清中Orexin A的含量随日龄的增长逐渐增加。
3.肌肉注射重组质粒pcDNA3.1(+)-OrexinA对小鼠采食量和体重的影响
小鼠采食量和体重的统计数据表明,肌肉注射5~25μg的重组质粒pcDNA3.1(+)-OrexinA对小鼠白天、夜间和全天采食量均没有显著的影响(P>0.05);各处理组间体重差异不显著(P>0.05)。