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野生达乌尔黄鼠(Citellus dauricus Brandt)是一种长日照的动物,有典型的季节性繁殖和冬眠的特点,在每年4月份出蛰进入繁殖期,5月底之后进入非繁殖期,直到在九月底十月初进入冬眠。在冬眠前,达乌尔黄鼠会出现生殖系统中睾丸和附睾复发现象。雄激素和雌激素是调节睾丸发育和精子发生及获能的主要因子。本文的研究目的是利用形态学方法检测野生雄性达乌尔黄鼠和睾丸附睾在繁殖期、非繁殖期及冬眠前期的体积大小和重量变化;利用组织学观察方法观察野生达乌尔黄鼠睾丸和附睾组织学的季节性变化;通过免疫组织化学方法调查雄激素受体(androgenreceptor,AR),雌激素受体α(estrogen receptorsα,ERα)、雌激素受体β(estrogenreceptorsβ,ERβ)和细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450aromatase,P450arom)在野生达乌尔黄鼠睾丸和附睾中的表达定位;通过实时定量PCR手段来检测AR、ERα、ERβ和CYP19a1在生殖周期中的表达量的季节性变化。实验结果显示,野生达乌尔黄鼠繁殖期的睾丸和附睾重量明显高于非繁殖期和冬眠前期的重量,而冬眠前期睾丸和附睾重量相对于非繁殖期却有显著升高。组织学结果显示,在繁殖期睾丸曲细精管中存在包括成熟精子在内的各种类型的生精细胞,在非繁殖期只有精原细胞和初级精母细胞,而在冬眠前期曲细精管中有次级精母细胞;附睾中在繁殖期主细胞数量及管腔直径明显高于非繁殖期,冬眠前期的主细胞数量及管腔直径有升高趋势但不显著。免疫组织化学结果显示在睾丸中,AR在繁殖期睾丸中支持细胞、间质细胞和肌样细胞中强烈表达,在冬眠前期只有较明显表达,但在非繁殖期表达只有间质细胞表达;在附睾中AR主要表达在繁殖期主细胞和管周肌样细胞中,而非繁殖期和冬眠前期表达强度低。P450arom在繁殖期睾丸的间质细胞、支持细胞和生殖细胞中强烈表达,而在非繁殖期不表达,在冬眠前期中只有支持细胞和间质细胞中有微弱表达;在附睾中P450arom只有在繁殖期主细胞中有较强烈的表达,精子中也有明显的免疫染色,而在非繁殖期和冬眠前期仅有微弱的表达。ERα和ERβ无论是在睾丸还是附睾中的免疫染色强度都明显高于非繁殖期;ERα只有在冬眠前期睾丸中有微弱的表达,ERα在非繁殖期附睾头部出现了明显表达,但在尾部表达不明显;在冬眠前期附睾上皮有的ERα表达。实时定量PCR结果显示,AR、P450arom和ERα的mRNA水平在繁殖期的睾丸和附睾中最高,而在非繁殖期明显降低,同时在睾丸中ERα和P450arom mRNA水平的表达在冬眠前期显著高于非繁殖期的表达。这些结果说明,在野生达乌尔黄鼠睾丸和附睾功能的季节性变化过程中,雄激素可以直接影响精子发生和精子获能的过程,也可通过转化成雌激素形式,在睾丸和附睾在精子发生和精子获能过程中起调节作用。