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近年来,转基因鱼研究取得长足进步,外源蛋白在转基因鱼中的表达量得到显著提高,初步突破了转基因鱼走向市场的技术障碍。转绿色荧光蛋白基因青()首先实现了商品化,转红色荧光蛋白基因斑马鱼在美国获准进入观赏鱼市场,向采用转基因技术培育观赏鱼新品种迈出了重要的一步。唐鱼是我国特有的小型鲤科鱼类,在观赏鱼界占有重要地位。为了探讨开发具有较高观赏价值的转基因唐鱼的可行性,本研究尝试利用转基因技术,分别将红色和绿色荧光蛋白基因转入斑马鱼和唐鱼受精卵,并使其在肌肉组织特异性高效表达。结果表明,转红色荧光蛋白基因唐鱼在普通光下体色呈现鲜红色,肉眼可见荧光,与野生型有明显区别,在紫外光下则发出强荧光,观赏价值得到明显的提高,为利用转基因技术开发新的观赏鱼品种打下了基础。1.斑马鱼肌球蛋白轻链2(mylz2)启动子的克隆及荧光蛋白表达载体的构建
采用PCR(聚合酶链式反应)方法,从斑马鱼基因组DNA中分离得到了斑马鱼肌球蛋白轻链2启动子基因。该启动子为肌肉特异性启动子,大小为1936bp,包含了1个TATA框、4个MEF2结合位点和6个与bHLH转录因子相结合的E-框(CANNTG)。
采用显微注射方法,将线性化的绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-mylz2)和红色荧光蛋白表达载体(pDsRed-mylz2)分别导入斑马鱼和唐鱼受精卵中,获得了转绿色荧光蛋白基因斑马鱼(出膜率为52.8%,观察到荧光的胚胎数占注射存活胚胎总数的7.2%)、转红色荧光蛋白基因斑马鱼(出膜率为47.0%,观察到荧光的胚胎数占注射存活胚胎总数的17.0%)、转绿色荧光蛋白基因唐鱼(出膜率为37.4%,观察到荧光的胚胎数占注射存活胚胎总数的7.2%)和转红色荧光蛋白基因唐鱼(出膜率为36.9%,观察到荧光的胚胎数占注射存活胚胎总数的25.9%)。