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研究目的随着年龄的增长和体内雌激素水平的下降,机体氧化-抗氧化系统失衡诱发氧化应激反应增加,导致骨量丢失和骨折风险增加。中医认为女贞子具有补肝肾、强筋骨和抗衰老的作用。临床和基础研究也证明,女贞子具有抗衰老和抗氧化的作用。但是女贞子是否具有调节氧化应激反应而发挥抑制骨量丢失和改善骨代谢的作用及作用机理尚不清楚。因此,本文拟探讨女贞子水提液通过调节氧化-抗氧化平衡而改善骨质疏松模型大鼠骨代谢的作用和作用机理。研究方法切除雌性SD大鼠的双侧卵巢,建立骨质疏松模型,将造模成功后的大鼠,分为三组（每组9只）分别为:模型组（OVX）、雌二醇组（EV）和女贞子水提液组（FLL）。同时设假手术组（Sham）,仅切除大鼠双侧卵巢周围等体积脂肪。其中,女贞子水提液组（FLL）大鼠灌服女贞子水提液（3.5 g/kg）,雌二醇组（EV）大鼠灌服雌二醇（0.1 mg/kg）,模型组（OVX）和假手术组（Sham）大鼠灌服等体积的去离子水。连续灌胃12周后,分别收集大鼠的血清以及胫骨、股骨和子宫组织,然后利用生化分析法测定大鼠胫骨、子宫和血清中总抗氧化能力（total antioxidant capacity,TAC）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性;用ELISA法测定大鼠胫骨、子宫和血清中的8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-desoxyguanosine,8-OHdG）含量,以及血清中的核因子κB受体活化因子配体（Receptor Activator for Nuclear Factor-κB Ligand,RANKL）、抗酒石酸酸性磷酸酶 5b（tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TRAP5b）和组织蛋白酶K（Cathepsin K）的含量;用Discovery Wi双能X线（DXA）骨密度仪测定股骨骨密度（Bone Mineral Density,BMD）;利用HE染色法观察股骨组织骨小梁的结构和形态;利用免疫组化法、免疫荧光法和Western Blot法观察子宫、胫骨和股骨中核因子 κB（Nuclear Factor-κB,NF-κB）-p65、NF-κB-pp65、NF-κB 抑制剂 α（NF-κB inhibitor alpha,IκBα）、p-IκBα、NADPH 氧化酶 4（NADPH oxidase 4,Nox4）的表达,以及胫骨中 RANKL、肿瘤坏死因子相关因子 6（tumor necrosis factor receptor-associated factor-6,TRAF6）、激活 T 细胞的核因子 c1（Nuclear factor of activated T-cells,NFATc1）、Cathepsin K、细胞色素 C（Cytochrome C,Cyto-C）和 B 细胞淋巴瘤 2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）的表达。研究结果（1）女贞子水提液对去卵巢大鼠股骨骨密度和骨微结构的影响。骨密度分析结果显示,与假手术组大鼠相比,去卵巢大鼠股骨骨密度明显下降（P<0.05）,女贞子水提液给药12周后能明显地升高股骨骨密度（P<0.05）;HE染色表明,去卵巢大鼠股骨的骨皮质厚度减小,骨小梁面积减小（P<0.05）,骨小梁断裂,排列紊乱,女贞子水提液给药12周后能明显地改善去卵巢大鼠股骨微结构,增加股骨骨密度,骨皮质厚度和骨小梁面积（P<0.05）。（2）女贞子水提液对去卵巢大鼠氧化应激和骨吸收相关指标的影响。与假手术组大鼠相比,去卵巢大鼠血清和子宫中TAC水平明显降低（P<0.05）,女贞子水提液干预12周后能显著提高去卵巢大鼠血清（16.17%）和子宫（164.2%）中的TAC水平（P<0.05）;与假手术组大鼠相比,去卵巢大鼠血清中SOD活性明显降低（P<0.05）,女贞子水提液干预12周后有升高去卵巢大鼠血清SOD的趋势,但是无明显地统计学差异;与假手术组大鼠相比,去卵巢大鼠血清、胫骨和子宫中的MDA和8-OHdG含量明显升高（P<0.05）,女贞子水提液干预12周后,能明显地降低去卵巢大鼠血清（57.3%）、胫骨（63.5%）和子宫（73.8%）中MDA的含量（P<0.05）,能明显地降低去卵巢大鼠血清（18.5%）、胫骨（33.4%）和子宫（28.8%）中的8-OHdG含量（P<0.05）;ELISA结果显示,与假手术组大鼠相比,去卵巢大鼠血清中的RANKL、Cathepsin K和TRAP5b含量明显升高（P<0.05）,女贞子水提液干预12周后,明显地降低去卵巢大鼠血清中RANKL（17.5%）、Cathepsin K（13.5%）和TRAP5b（10.4%）的含量（P<0.05）。表明女贞子能够调节去卵巢大鼠体内氧化-抗氧化平衡,下调骨吸收标志物的含量。（3）女贞子水提液对NF-κB活化的影响。免疫组化的结果显示,与假手术组大鼠相比,去卵巢大鼠子宫和股骨中的NF-κB-p65的含量明显升高（P<0.05）,女贞子水提液干预12周后能明显地下调去卵巢大鼠子宫和股骨中的NF-κB-p65的水平（P<0.05）;免疫荧光结果显示,与假手术组大鼠相比,去卵巢大鼠胫骨中NF-κB-p65的核转移增加,女贞子水提液干预12周后能明显地抑制去卵巢大鼠胫骨中NF-κB-p65的核转移。Western blot结果显示,与假手术组大鼠相比,去卵巢大鼠胫骨中的p-lκBα/IκBα、NF-κB-pp65/NF-κB-p65的比率明显升高,子宫中p-IκBα/IκBα的比率以及NF-κB-p65和NF-κB-pp65水平明显升高（P<0.05）,女贞子水提液干预12周后能明显地降低去卵巢大鼠胫骨中p-IκBα/IκBα、NF-κB-pp65/NF-KB-p65的比率,降低去卵巢大鼠子宫中p-IκBα/IκBα比率,下调子宫中NF-κB-pp65和NF-κB-p65水平（P<0.05）,表明女贞子水提液能够抑制NF-κB-p65的核转移,抑制NF-κB的激活。（4）女贞子水提液对去卵巢大鼠Nox4的影响。Western blot和免疫组化的结果显示,与假手术组大鼠相比,去卵巢大鼠子宫、胫骨和股骨中的Nox4水平明显升高（P<0.05）,女贞子水提液干预12周后能明显地下调去卵巢大鼠子宫、胫骨和股骨中Nox4 的含量（P<0.05）。（5）女贞子水提液对去卵巢大鼠胫骨中Bcl-2和Cyto-C的影响。Western blot结果显示,与假手术组大鼠相比,去卵巢大鼠胫骨中Bcl-2表达量升高,胫骨胞浆中Cyto-C的含量升高（P<0.05）,女贞子水提液干预12周后能明显地降低去卵巢大鼠胫骨中Bcl-2的表达,阻碍胫骨线粒体Cyto-C向胞浆的释放（P<0.05）。（6）女贞子水提液对去卵巢大鼠RANKL、TRAF6、NFATc1和Cathepsin K含量的影响。Western blot和免疫组化结果显示,与假手术组大鼠相比,去卵巢大鼠胫骨和股骨中RANKL和Cathepsin K的含量升高（P<0.05）,女贞子水提液干预12周后能明显地降低去卵巢大鼠胫骨和股骨中RANKL和Cathepsin K的表达（P<0.05）。Western blot结果显示,去卵巢大鼠胫骨中TRAF6和NFATc1的含量升高（P<0.05）,女贞子水提液干预12周后能明显地降低去卵巢大鼠胫骨中TRAF6和NFATc1的含量（P<0.05）。结论（1）女贞子水提液能改善去卵巢大鼠的骨微结构,抑制去卵巢大鼠的骨密度下降。（2）女贞子水提液通过上调TAC水平,下调MDA和8-OHdG水平改善去卵巢大鼠体内的氧化-抗氧化平衡。（3）女贞子水提液通过调节Nox4/RANKL-ROS-NF-κB信号通路发挥抗氧化作用,是其改善骨质疏松的分子机制之一。