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牛传染性鼻气管炎（Infectious bovine rhinotraeheitis,IBR）是由牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotraeheitis virus,IBRV）又称牛疱疹病毒Ⅰ型（Bovine herpes virus type 1,BoHV-1）引起的一种的急性、热性、接触性传染病,表现为鼻炎、生殖道和呼吸道炎症、乳腺炎、结膜炎等,还能引起母牛流产、死胎。目前还没有一种针对此病的特效药,只能通过疫苗免疫控制流行。相对于常规灭活及减毒疫苗而言,基因工程疫苗有安全、稳定、免疫原性强等特点,且能够进行鉴别诊断,应用前景广泛。本研究基于BoHV-1 gG-/tk-双基因缺失疫苗建立了豚鼠评价模型,以期通过与牛体试验结果进行比较,替代牛体试验成为IBR疫苗效力的初步评价方法。同时,对BoHV-1三基因缺失突变株BoHV-1 gN-/tk-/gG-的生物学特征与免疫效能进行了研究,为临床IBR新型疫苗的开发提供基础。主要研究内容和结果如下:1.BoHV-1 gG-/tk-双基因缺失疫苗豚鼠免疫反应评价模型的建立（1）豚鼠IBR野毒感染试验参考OIE相关资料,通过对豚鼠直接进行野毒株攻毒来建立野毒感染模型,通过典型临床症状及体温、排毒情况、对组织的损害情况以及组织中病毒核酸的检测,确定了BoHV-1攻毒后能够引起豚鼠产生BoHV-1特征性临床症状,且能引起豚鼠向外排毒,并对组织造成损害,表明豚鼠能够作为牛传染性鼻气管炎感染模型。（2）BoHV-1 gG-/tk-双基因缺失疫苗安全性试验为确定该双基因缺失疫苗在豚鼠体内的安全性,对疫苗免疫后豚鼠的免疫效果进行评价。疫苗接种后,对豚鼠的临床症状和体温变化、特异性抗体gB、中和抗体和细胞因子水平进行检测,结果显示,不论采用滴鼻还是肌肉注射接种途径,106TCID50、107TCID50和108TCID50三个剂量的BoHV-1 gG-/tk-双基因缺失疫苗均能在豚鼠体内诱导免疫应答,疫苗组仅出现轻微临床症状、未检测到排毒、体温变化不显著、检测到特异性gB抗体、中和抗体及细胞因子的产生,实验结果也表明,高、中、低三个剂量之间存在量效关系,而且加强免疫能够极有效地促进抗体的产生,最后,从整体来看,肌肉注射诱导免疫应答强于滴鼻接种,由此,确定了BoHV-1gG-/tk-双基因缺失疫苗安全性良好。（3）BoHV-1 gG-/tk-双基因缺失株的免疫效力试验采用BoHV-1 gG-/tk-双基因缺失疫苗以106TCID50、107TCID50和108TCID50剂量肌肉注射免疫、wt BoHV-1攻毒的模型,利用临床症状、体温变化、排毒情况、体液免疫抗体水平的测定、细胞免疫细胞因子等的测定以及组织的病毒核酸检测和病理变化观察等指标对豚鼠免疫/攻毒模型的保护效力进行了评价,各免疫攻毒组临床症状出现时间比未免疫攻毒组短,体温无显著性差异,从鼻拭子当中未分离到病毒。各组的抗体水平与攻毒时的抗体水平为正相关关系,即呈现量效关系。肺脏病变程度结果显示,病变程度与疫苗接种剂量呈现负相关,疫苗接种剂量越大,攻毒后病变程度越轻微。同时,佐剂对该疫苗免疫反应具有较大影响,在相同接种剂量和接种途径条件下,比较了加佐剂组和不加佐剂组的差异,结果表明,当疫苗混合佐剂时,诱导豚鼠更强烈的体液和细胞免疫反应,抗体水平包括特异性gB抗体和中和抗体均高于相同疫苗接种剂量的未加佐剂组,尤其是中和抗体。另外,佐剂也能促进IFN-γ的产生。2.三基因缺失突变株BoHV-1 gN-/tk-/gG-的生物学特征和免疫效能研究本试验通过重组病毒拯救、毒价的测定、噬斑大小以及生长曲线的测定等,对BoHV-1 gN-/tk-/gG-的生物学特征进行了验证,结果显示重组病毒拯救成功,重组毒株相较于野毒株噬斑变小,病毒滴度变小但无显著变化（p>0.05）。本试验也评价了该突变株在兔体内的免疫效能,以107TCID50为剂量,采用滴鼻和肌肉注射两种方式接种,28d后用野毒株wt BoHV-1攻毒,结果显示,与野毒组相比,突变株接种组临床症状和排毒的持续期均较短。接种后,肌肉注射组能够更快速的产生抗体,但相较于野毒组,其中和抗体滴度上升较慢,然而滴鼻组在攻毒前抗体均为阴性,只在攻毒后才转阳,滴度显著低于肌注组（p<0.001）。攻毒后肌注组抗体水平有显著性的提升,于49d达到最高值（1:114）,高于野毒组（1:79）,并于42d和49d时均极显著高于滴鼻组（p<0.001）。sIgA检测结果显示,野毒组sIgA浓度最高,与空白对照组在7d、21d形成极显著性差异（p<0.01）,在14d、28d形成显著性差异（p<0.05）,其余各组之间无显著差异（p>0.05）。细胞因子检测结果显示,肌肉注射接种组的TNF-α水平于7d、14d、21d均显著性高于空白组（p<0.05）,14d时也显著高于wt组（p<0.05）。滴鼻接种组与各组之间无显著性差异（p>0.05）。对比分析各组IFN-γ水平,无显著性差异（p>0.05）。说明三基因缺失突变株BoHV-1 gN-/tk-/gG-能够在兔体内诱导免疫应答,并能够在攻毒后提供保护力,减轻临床症状,减少排毒时间,综合各项指标,肌肉注射为最合适的接种途径。