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研究背景:三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)是一种常见有机溶剂,接触一段时间TCE的工人可能发生职业性三氯乙烯药疹样皮炎(occupational dermatitis medicamentosa-like of trichloroethylene,ODMLT),伴发严重的肝脏损伤。临床观察中发现ODMLT病人在发病前期常出现头痛、发热等病毒性全身感染的症状。此外有研究指出病人血清中抗病毒抗体滴度显著升高,疱疹病毒和巨细胞病毒出现再次激活,佐证了ODMLT与病毒感染密切相关这一现象。前期动物实验表明TCE致敏小鼠肝脏发生免疫损伤,补体激活参与其中。同时相关基础研究提示病毒模拟物聚肌胞苷酸(polyinosine-polycytidylic acid,poly(I:C))可以通过激活Toll样受体-3上调局部B因子水平以促进补体从旁路途径激活。本次研究探讨了腹腔注射poly(I:C)是否可以通过促进补体激活加重TCE致敏导致的肝脏免疫损伤,尝试解释临床中病情与病毒感染之间在机制上的联系。研究目的:以TCE致敏小鼠模型为基础,采用腹腔注射poly(I:C)模拟病人发病前的全身病毒感染状态,观察该处理是否加重TCE致敏介导的小鼠肝脏损伤,检测肝脏局部补体激活程度,探索补体是否参与该免疫损伤放大的过程。研究方法:购买40只6-8周雌性BALB/c小鼠,经适应性饲养后分为溶剂对照组(n=5)、poly(I:C)对照组(n=5)、TCE处理组(n=15)和联合处理组(n=15),联合处理组小鼠于末次TCE激发前3小时腹腔注射50μg poly(I:C)。末次激发后48小时根据皮肤致敏反应评分将小鼠分为致敏或未致敏组,随后麻醉、处死小鼠,收集血清、肝脏。采用全自动生化仪检测肝功能指标ALT和AST,免疫比浊法测定血清补体C3水平,HE染色法观察小鼠肝脏病理学损伤程度,免疫组化法检测肝脏局部补体激活水平和细胞因子沉积水平,Real-time RT-PCR检测肝脏补体C3、补体调节蛋白和B因子的基因转录水平,Western Blotting检测肝脏B因子的蛋白表达相对量。结果:1.皮肤致敏反应评判:溶剂对照组和poly(I:C)对照组小鼠背部均未发现皮炎反应。TCE处理组致敏率6/15(40.0%),联合处理组致敏率5/15(33.3%),两者间无统计学差异。2.肝脏解剖学外观评价和脏器系数比较:溶剂对照组和poly(I:C)对照组肝脏未发现明显病变。非致敏组肝脏也未见明显异常。TCE致敏组肝脏肿大,脏器系数显著高于溶剂对照组(P<0.05)。联合处理致敏组肝脏呈黄褐色、质脆易碎,体积肿大,脏器系数显著高于溶剂对照组(P<0.05)。3.肝脏病理学研究:溶剂对照组和poly(I:C)对照组肝脏切片未见病理学异常。非致敏组肝脏未见病理学损伤。TCE致敏组肝脏偶见肝细胞肿大和汇管区炎细胞浸润。联合处理组肝脏肝细胞水肿明显,常见气球样变性,汇管区常见中性粒细胞浸润。4.肝功能指标检测结果:poly(I:C)对照组血清ALT和AST水平较溶剂对照组水平无统计学差异。非致敏组肝功能水平较溶剂对照组无统计学差异。TCE致敏组血清ALT和AST均轻微升高,显著高于溶剂对照组水平(P<0.05)。联合处理致敏组ALT和AST均明显升高,显著高于溶剂对照组和TCE致敏组水平(P<0.05)。5.肝脏细胞因子沉积水平检测:溶剂对照组、poly(I:C)对照组、非致敏组肝脏未检测到TNF-α、IL-1β和IL-6的沉积。TCE致敏组和联合处理组均发现三种蛋白的沉积,其中以TNF-α表达居多,三种蛋白表达水平在两组中无显著差异。6.血清补体C3含量比较:与溶剂对照组水平相比,poly(I:C)对照组和TCE致敏组血清C3水平均无统计学差异。联合处理致敏组水平较溶剂对照组和TCE致敏组水平显著下降(P<0.05)。7.肝脏C3转录能力比较:与溶剂对照组肝脏C3转录水平相比,poly(I:C)对照组、TCE致敏组和联合致敏组肝脏C3转录水平均无显著上调或下调。8.肝脏局部补体激活水平检测:溶剂对照组、poly(I:C)对照组、非致敏组肝脏未检测到补体激活。TCE致敏组肝脏有少量C3片段和MAC沉积。联合处理致敏组肝脏有大量补体激活标志性蛋白表达。9.肝脏补体调节蛋白表达比较:与溶剂对照组比较,poly(I:C)对照组和联合处理致敏组的四种补体调节蛋白(CD55、CD59、CD46和Crry)的转录水平均无显著变化,而TCE致敏组肝脏CD59、CD46和Crry的转录水平显著下降(P<0.05)。10.肝脏B因子表达比较:与溶剂对照组比较,poly(I:C)对照组和TCE致敏组肝脏B因子表达水平无明显差异。而联合处理致敏组肝脏B因子显著上调(P<0.05)。结论:1.腹腔注射poly(I:C)显著加剧TCE致敏诱导的肝脏损伤;2.TCE致敏组肝脏补体激活上调,可能由调节蛋白水平显著下降引起;3.联合处理致敏组肝脏局部补体激活水平显著上升,可能由B因子表达显著上调介导。4.联合处理致敏组血清C3水平显著下降,但并不由肝脏C3转录能力受损介导。