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急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是由多种肺内外致病因素导致的以进行性呼吸困难为主要临床表现的急性呼吸衰竭,其发病机制非常复杂,病死率高达50%-70%,迄今为止尚无特效的治疗措施。Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)是机体免疫系统中一类重要的跨膜受体Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)家族成员,它是鞭毛蛋白的特异性受体。鞭毛蛋白是G—细菌鞭毛的主要结构蛋白。目前认为,鞭毛蛋白具有强致炎作用,可通过TLR5引起局部或全身炎症反应。它也是脓毒症急性肺损伤的潜在致病因子之一。但鞭毛蛋白诱导急性肺损伤的途径及机理尚未见文献报道。本实验通过注射纯化鞭毛蛋白复制大鼠急性肺损伤模型,观察肺组织TLR5表达及NF-κB活性变化,以期探讨TLR5在鞭毛蛋白致急性肺损伤中的作用及其信号转导途径。实验方法:用酸裂解法从大肠杆菌分离出粗制鞭毛蛋白,并经除盐、弱阴离子交换,获得纯化的鞭毛蛋白。用其经尾静脉注射复制大鼠急性肺损伤模型。实验分为正常对照组(注射生理盐水)、致伤1组(注射鞭毛蛋白50μg/Kg )和致伤2组(注射鞭毛蛋白500μg/Kg)。各组分别在致伤后0h、0.5h、1h、2h、4h、6h时相点,采用原位杂交(in situ hybridization,ISH)技术检测肺组织TLR5mRNA表达,通过凝胶电泳迁移率试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测核提取物中NF-κB活性,并观察动脉血氧分压(partial pressure of oxygen in artery,PaO2)、肺湿干比值(wet/dry ratio,W/D)的变化和肺组织病理学改变。实验结果:(1)纯化的鞭毛蛋白经SDS-PAGE电泳,分子量约为65KD。(2)纯化的鞭毛蛋白经Western Blotting检测,在65KD处见到清楚的蛋白条带。(3)采用静脉注射鞭毛蛋白的方法,可成功地复制大鼠急性肺损伤模型。在致伤过程中,①两致伤组PaO21h后显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),并呈进行性下降。②肺W/D比值1h后显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),并呈进行性升高。③肺组织TLR5mRNA从1h后开始检测到表达,其水平随时间和鞭毛蛋白剂量升高。④肺组织NF-κB活性1h后显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。⑤肺组织病理学改变:致伤1组2h后和致伤2组