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本论文以水解金盏菊提取物中叶黄素酯从而得到游离态叶黄素为研究对象,主要包括以下六个方面。 (1)国内外关于叶黄素方面的研究进展。 查阅国内外近二十年来关于叶黄素和叶黄素酯的相关文献,对其分析、提取、分离、转化工作进行了归纳和总结。 (2)建立了同时测定叶黄素和叶黄素酯的HPLC法。 建立了一种高效液相色谱法同时测定金盏菊中叶黄素和叶黄素含量的方法。采用KNAUER Eurospher-100 C18(3.9×300mm,4.6μm)色谱柱,以乙腈-甲醇-乙酸乙酯混合液为流动相(v/v/v 55:1:44),流速1.0mL/min;检测波长460nm;柱温:25℃。 (3)建了化学法转化叶黄素酯为游离态叶黄素的工艺。 考察了皂化工艺中溶剂类型、KOH浓度、反应时间、反应温度和反应底物比例对皂化结果的影响,最佳皂化工艺为:将10.0克叶黄素酯加入50mL饱和KOH甲醇溶液,在室温下(25℃)下反应4h。 (4)建立了叶黄素分离纯化工艺 叶黄素最佳纯化工艺为:将皂化液的滤渣水洗的最佳条件为5℃,冷水洗涤至流出液呈中性,过滤,干燥即可获得纯度大于22.0%的叶黄素产品;将水洗后滤渣,用40mL5℃正己烷分两次洗涤,再在常温下溶于二氯甲烷中制得饱和溶液,向饱和溶液中滴加正己烷至出现浑浊,放入冰箱于5℃静置过夜,再滴加二氯甲烷0.4倍正己烷静置过夜,过滤后即得到纯度大于>90.0%的叶黄素产品。 (4)叶黄素酯生物转化法的菌种筛选。 用平板诱导培养基考察了糙皮侧耳、黑曲酶、青霉对叶黄素酯的降解作用,发现接种青霉和黑曲酶孢子均能将培养基中叶黄素酯转化为游离态叶黄素,青霉的转化效果优于黑曲霉;糙皮侧耳孢子在培养基上不能生长,但接种菌种后亦能将培养基中叶黄素酯转化为游离态叶黄素。 (5)青霉摇瓶发酵法转化初步研究 用青霉摇瓶发酵转化叶黄素酯法制备叶黄素,考察了pH值、接