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目的 : 探讨当归红芪超滤物对X线照射人肝癌SMMC-7721细胞自噬性凋亡及Bcl-2蛋白的表达影响。
方法 : 将1×105SMMC-7721细胞接种于100ml培养瓶中,24小时以0.2 Gy/min剂量率X射线照射,剂量为4.0 Gy。分为正常对照组(C:纯细胞)、辐照组(R:纯辐射)、辐照加药组(R+D:辐射+当归红芪超滤物),包括药物低剂量组(LD:4mg/ml)、药物中剂量组(MD:6mg/ml)、药物高剂量组(HD:8 mg/ml)。24小时后对细胞计数;光学显微镜下观察细胞形态;在电镜下观察细胞超微结构;用流失细胞仪检测细胞周期变化;MTT法检测细胞生长抑制率;并采用Western-blot法检测细胞中Bcl-2 蛋白表达情况。
结果 :(1)光镜下形态学观察:C组细胞贴壁后生长良好、边界清楚,呈梭形或菱形。R组细胞数量减少,且少量细胞呈现圆形。R+HD组的SMMC-7721细胞形态有明显变化,随药物剂量的增加细胞存活量逐渐减少,细胞呈圆形数量增多,可见许多细胞碎片。(2)电镜下形态学观察:R组细胞核增大且明显畸形、线粒体呈空泡状。R+D组随药物浓度的增加,细胞核固缩、溶解,染色质边聚,内质网扩张,空泡形成增多,线粒体明显肿胀。表明照射后给予中药,细胞明显出现自噬性凋亡现象。(3)MTT法检测细胞生长抑制率:各不同浓度加药组24小时抑制率分别为36.4%、44.5%、61.8%。且相互间有统计学意义(p<0.05)(4)FCM检测显示:G0/G1期细胞比例上升,S期比例下降;随着药物浓度的增加,G0/G1期比例增加、S期比例降低更明显,表明细胞在G1期出现阻滞,细胞有自噬现象,尤其是R+HD组最显著。四个R+D组均明显高于R组(p<0.05),且相互比较有统计学意义(p<0.05)。(5)Bcl-2蛋白表达:辐照SMMC-7721细胞后给予8mg/ml的药物24小时后,Bcl-2蛋白表达情况降低,与C组、R组相比较表达明显降低。
结论: 经X线照射后的人肝癌SMMC-7721细胞,给予不同剂量当归红芪超滤物存活率下降;细胞出现自噬性凋亡;G1期受到阻滞;Western-blot结果显示Bcl-2蛋白表达在8mg/ml剂量下呈下降趋势。 表明X线照射后给予当归红芪超滤物对肝癌的治疗可以起到一定的辅助作用。