转录因子环腺苷酸反应元件结合蛋白对宫颈癌细胞周期的调控及其机制研究

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背景意义宫颈癌是世界上常见的女性恶性肿瘤之一,严重威胁女性的身体健康。其发生发展是一个多因素参与、多基因改变及多阶段发展的复杂病变过程。新近研究发现,转录因子环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)介导的目的基因在肿瘤形成和发展过程中扮演重要角色。我们的前期研究结果发现,天花粉蛋白(TCS)诱导宫颈腺癌细胞凋亡的机制之一与CREB介导的Bcl2蛋白表达有关。我们进一步的研究结果表明,TCS抑制腺癌细胞增殖的过程中,首先抑制CREB蛋白的表达进而引起抑制细胞的增殖。这些结果提示,CREB蛋白表达可能与宫颈癌的发生发展密切相关。然而,转录因子CREB对细胞周期的调控,尤其是细胞周期蛋白的表达在此过程中的作用尚无文献报道。因此,探讨CREB对宫颈癌细胞的调控及其机制,对揭示宫颈癌的发生和发展有重要意义。本文首先研究转录因子CREB对宫颈鳞癌细胞增殖的影响;其次探讨细胞周期及其蛋白在此过程中的作用;第三构建携带有CREB全长基因和定点突变基因的表达载体,转染细胞后进一步阐明CREB抑制细胞增殖是通过调控细胞周期蛋白,进而探讨细胞周期的分子机制。研究方法(1)MTT实验确定TCS处理宫颈鳞癌细胞(CaSKi和C33A)的最佳时间和浓度;(2)流式细胞术检测TCS对宫颈癌细胞的周期调控;(3)构建CREB的高表达和突变重组质粒,然后转染细胞以实现CREB的高表达和低表达;(4)Wertern blot技术分析药物处理前后以及质粒转染前后细胞周期蛋白表达的差异情况。研究结果TCS处理宫颈癌鳞癌细胞系(CaSKi和C33A)后,(1)细胞的阻滞周期为G1期;(2)细胞内p-CREB、过表达的cyclin D1/E表达量减少,而CREB表达量变化不明显;(3)转染质粒后,CREB高表达质粒可部分抵消TCS对细胞周期蛋白表达的抑制作用,但CREB突变重组质粒则进一步加剧了这一抑制作用。结论转录因子CREB通过影响人宫颈癌鳞癌细胞cyclin D1/E的表达,进而实现对细胞周期的调控。
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