【摘 要】
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WRI1（WRINKLED1）是油脂代谢调控中关键的转录因子之一,在调控碳流由糖到油脂及细胞内的碳氮平衡的生物过程中发挥着重要作用,WRI1的表达调控直接影响油脂的合成和积累。油菜（Brassica napus L.）是一种重要油料作物,油脂含量是油菜育种工作中的重点。因此,在油菜中展开对WRI基因的功能分析,对进一步解析油脂分子调控机制有着重要意义。本研究通过生物信息学分析,发现在油菜中有12个
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WRI1（WRINKLED1）是油脂代谢调控中关键的转录因子之一,在调控碳流由糖到油脂及细胞内的碳氮平衡的生物过程中发挥着重要作用,WRI1的表达调控直接影响油脂的合成和积累。油菜（Brassica napus L.）是一种重要油料作物,油脂含量是油菜育种工作中的重点。因此,在油菜中展开对WRI基因的功能分析,对进一步解析油脂分子调控机制有着重要意义。本研究通过生物信息学分析,发现在油菜中有12个WRI成员,命名为BnWRI01-12;克隆到了其中 10个BnWRI基因即 BnWRI01-06、BnWRI08和BnWRI10-12的全长CDS,并通过Gateway系统构建完成了入门载体及用于植物及酵母转化的载体;利用蛋白序列通过聚类分析,发现BnWRI01、02、03属于AtWRI1亚家族,BnWRI04、05、06、08 属于 AtWRI2 亚家族,BnWRI10 属于 AtWRI3亚家族,BnWRI11、12属于AtWRI4亚家族。通过RT-qPCR,评价了 30个内参基因的表达稳定性,最终以BnaC-YLS8-2、BnaA-UBQ05-1、BnaA-CACS01和BrTub作为内参基因,分析了 10个具有全长的BnWRI的表达特征。BnWRI01、03、04、06在种子或角果中高表达,BnWRI10、11、12在花蕾和早期的花序中高表达,暗示BnWRI可能精细调控着油菜不同组织部位的油脂合成。在高油晚熟和低油早熟两种基因型的角果发育过程中,本研究发现Bn WRI在低油品种中的表达量相对较高。通过原生质体进行亚细胞定位发现,10个BnWRI均定位在细胞核中。10个BnWRI在酿酒酵母中异源表达,对其脂肪酸合成的影响存在差异:过表达BnWRI01对INVSc1酵母的脂肪酸含量没有显著影响,过表达BnWRI02和BnWRI03显著降低了 INVSc1酵母中的脂肪酸含量,过表达另外7个BnWRI都显著提高了 INVSc1酵母的脂肪酸含量,本研究证实了BnWRI03转录因子能够与BnBCCP1-2的启动子相互作用,调控BnBCCP1-2的表达。
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