SSH法构建Ty21a免疫小鼠与正常小鼠Peyer's patches细胞的cDNA消减文库及mCD164分子的克隆表达

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:MANYE28
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Peyers patches(PP结)是肠粘膜免疫系统中主要的诱导部位,在粘膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用,它决定粘膜免疫反应的发生、性质和强度.CD164是最近新发现的一个唾液粘蛋白分子,目前对其功能了解不多,在体内高表达于造血前体细胞表面的CD164分子,介导造血前体细胞与基质细胞的粘附,目前认为它可能是一个重要的造血前体细胞增殖的负调控分子.我们在构建Ty21a免疫后小鼠PP结组织cDNA消减文库的工作中发现,在免疫后的PP结组织细胞上,CD164分子表达上调.将pcDNA3.1-mCD164转染入HeLa细胞,经RT-PCR鉴定阳性克隆后,进行HeLa细胞入侵实验,观察到与不转染CD164的HeLa细胞相比,转染后的HeLa细胞入侵细胞菌量明显减少.pQE30-mCD164转化大肠杆菌M15,表达的目的蛋白经Ni-NTA纯化后免疫家兔做多抗.通过该研究,可以初步得出如下结论,SSH方法是发现差异基因的有效手段,CD164分子在病原菌入侵Peyers patches后的上调表达推测可能是机体自身产生得一种保护性反应,这有利于机体对病原菌的清除,但其机理还有待进一步的研究.
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